HPLC法测定黄柏提取液中盐酸小檗碱含量

2013-11-13周敬于天浩陈平董强梁园天津郁美净集团有限公司天津300110

江西中医药 2013年4期

★ 周敬于天浩陈平董强梁园 (天津郁美净集团有限公司天津300110)

中药药材黄柏为芸香科植物黄檗(Phellodendron amrense Rupr，关黄柏)，及黄皮树(Phellodendron chinese Schneid，川黄柏)的干燥树皮。黄柏因其具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等功效作为药材制备中药或中成药。很多资料表明，黄柏及其提取物对治疗湿疹、痤疮等皮科疾病具有良好的效果［1～5］。在化妆品提倡纯天然、绿色、环保的趋势下，天津郁美净集团成功地将黄柏提取物添加到化妆品中，使其具备抑菌、抑疹的功效。盐酸小檗碱是黄柏中最重要的活性成分，故探索以高效液相法(HPLC)测定黄柏中小檗碱的含量并做系统的方法学研究论证是天然提取关键技术的重要环节，拟建立快速高效准确盐酸小檗碱含量检测方法。

1 仪器与试剂

岛津LC－10AT高效液相色谱仪，包括LC－10AT双元泵，SPD－10A紫外检测器，CTO－10AS柱温箱，7725i手动进样器(日本岛津公司);N－2000双通道色谱据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);梅特勒托利多电子分析天平。

盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所110713－200911，)甲醇、乙腈为色谱纯;其它为分析纯。水为去离子水;实验材料为黄柏Phellodendron amrense Rupr，干燥树皮。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱:GL science Wondasil C18柱(4.6mm×250mm×5μm);流动相:乙腈－0.033mol/L KH2PO4溶液调pH=3.5(40:60);检测波长345nm;柱温:40℃;流速:0.8 mL/分;进样量:10μL。

2.2 对照品溶液的制备称取盐酸小檗碱对照品34.9mg于50mL量瓶，加沸水溶解并稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜待测。

2.3 供试品溶液的制备精密称取黄柏提取液2.0g(精确到0.0001g)于10ml量瓶中，加入少量沸水并用冷水稀释至刻度，摇匀。取上清液过 0.45μm微孔滤膜。

2.4 线性关系的考察精吸对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5μL，按2.1 进行测定，以峰面积为纵坐标，以对照品进样量(μg)作图，得线性良好的直线，方程为:Y=2 ×106X+375618，R=0.9999(n=5)，线性范围为:1.745μg～8.725μg。

2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液10μL在2.1条件下重复进样5次，计算盐酸小檗碱峰面积RSD=0.21%，表明仪器的精密度良好。结果见表1。

表1 精密度实验结果

2.6 重现性实验精密称取5份同批次黄柏提取液样品0.5g(精确到0.0001g)，按2.3制备供试液，精密吸取供试液10μL注入高效液相色谱仪，盐酸小檗碱含量的RSD=1.28%。

2.7 稳定性实验精密吸取样品10微升按2.1条件，分别在 0、1、3、6、9、24 小时进样，盐酸小檗碱含量的RSD=1.20%，在24小时内稳定性良好。

2.8 回收率试验称取与重复性试验同一批样品，分别加入80%、100%，120%的盐酸小檗碱对照品3份，混匀，精密称取，按2.2条件测定回收率，结果见表2。

表2 加样回收试验结果

2.9 样品含量的测定精密称取黄柏提取液1.0000g，按2.1条件，按外标－峰面积计算，测得结果见表3。

表3 黄柏提取液中小檗碱含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 检测波长的选择利用UV－2401紫外分光光度计对照品溶液在200－400 nm波长范围内进行扫描，在250－350 nm波长处有最大吸收，并且，因此选择345 nm为检测波长。

3.2 流动相的选择本实验考察了甲醇－水(0.1%乙酸)，乙腈－水(0.1%甲酸)，乙腈－水(0.1%十二烷基硫酸钠)，乙腈－水(0.05mol/L NaH2PO4调 pH3.5)，乙腈－水 (0.033mol/L KH2PO4调pH3.4)，等溶剂系统，以通过改变的比例，在合适的保留时间下出峰。整个分析过程在20分钟内可完成。因此，最后确定用乙腈－水(0.033mol/L KH2PO4调pH3.4)系统作为流动相。