广东省韶关市食品药品检验所（512028）刘旺培 黄义纯 陈华龙

维生素B1片为用于预防和治疗维生素B1缺乏症，如脚气病、神经炎、消化不良等药品，口服吸收快，安全有效。现行的国家药品标准没有对维生素B1片的含量均匀度作规定。本文介绍高效液相色谱法测定维生素B1的含量均匀度，具有分析方法简单、快速、分析结果准确、稳定的特点。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，四元梯度泵，自动进样器，Lc-solution工作站。维生素B1对照品（中国药品生物制品检定所提供），维生素B1片样品（2012年韶关市评价抽验和监督抽验）；甲醇和乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]色谱柱：Diamonsil，C18（150mm×4.6mm；5μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液（含1%三乙胺，用磷酸调节pH值至5.5，9∶9∶82）；检测波长为238nm；流速为1.0ml/min；进样量：10μl。

2.2 线性范围试验 精密称取维生素B1对照品适量，加水稀释至含维生素B1为0.5026mg/ml的储备液；分别吸取储备液溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10.0ml，置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度。分别取上述溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度作横坐标（X），以峰面积作纵坐标（Y），作线性回归，得回归方程。线性试验结果表明：维生素B1在50.5～505μg/ml浓度范围内具有良好的线性关系。回归方程分别为Y＝18240X+39282，r＝0.99999。

2.3 精密度试验 取含维生素B1浓度分别为101μg/ml的对照品溶液，精密取10μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，计算峰面积的RSD分别为0.1%。结果显示，本方法及仪器精密度良好。

附表1 维生素B1加样回收试验结果

附表2 3种批次维生素B1片的含量均匀度测量结果

2.4 溶液的稳定性试验 取同一维生素B1片样品溶液，置于室温下，分别于0h、2h、8h、12h、24h取样测定，结果显示，本品溶液在24h内测定，维生素B1的峰面积均无明显改变，说明本测定溶液较稳定。

2.5 回收率试验 精密量取已知含量的供试品0.06670（含维生素B1为9.513mg）置100ml容量瓶中，分别加入维生素B1（0.505mg/ml）对照品各1.6、2.0、2.4ml，加水稀释至刻度，精密取10μl注入液相色谱仪，测定回收率，结果见附表1。

2.6 含量均匀度测定 取维生素B1片（标示量10mg）置100ml量瓶中，加水约70ml，超声使维生素B1溶解，加水稀释至刻度，过滤，精密量取续滤液10μl，注入色谱仪，记录色谱图。另取维生素B1对照品适量，加水稀释至每1ml含0.1mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

以上述方法分别测定3批维生素B1片的含量均匀度，含量均匀度A+1.80S，，X为标示含量为100的相对含量。

结果显示，3批样品的含量均匀度均符合规定（A+1.80S≤15.0）。见附表2。

3 讨论

3.1 流动相和溶剂的选择 维生素B1为水溶性物质，在水中溶解性很好，在中性水中相对稳定，用水做溶剂既经济又环保，且便于操作。本文选用甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液（含1%三乙胺，用磷酸调节pH值至5.5，9∶9∶82）为流动相，维生素B1的峰形好，保留时间适中。

3.2 测定波长的选择 以水为空白，用供试品溶液和对照品溶液在200～400nm波长范围内扫描，结果维生素B1在238nm波长处有最大吸收，所以选择238nm为测定波长，且在238nm波长处杂质吸收小。

3.3 结果 实验证明，该研究提出的HPLC法测定维生素B1片含量均匀度，选择性、准确度及专属性高，且方法简便、精密度高、重现性好，自动化程度高，可作为维生素B1片的质量控制方法。