逄小红 李效良 张国琴

(1.泰山医学院，山东 泰安 271016;2.山东省泰山疗养院，山东 泰安 271000)

胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor 2 receptor，IGF2R)与多种肿瘤的发生密切相关，是潜在的肿瘤抑制基因，对正性生长因子胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2，IGF2)降解和负性生长因子TGF-β1激活具有重要作用［1］。研究发现，人群中IGF2R基因codon 901(exon 6 C→G，Leu→Val)和 codon 2020(exon 40 A→G，Asn→Ser)具有单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)。目前有关IGF2R基因多态性与肿瘤发病风险关系的研究尚不多见。因此，我们在华北地区开展了病例-对照研究，探讨 IGF2R codon 901C/G和codon 2020 A/G基因多态性与胃癌易感性的关联。

1 材料与方法

1.1 研究对象 105例胃癌患者为2007～2009年在当地两所三甲医院门诊或住院就诊的患者，均经胃镜或手术切除病理活检组织证实。其中男性57例，女性48例;年龄36～72岁，中位年龄52岁。对照组为235例同时期同一地区健康无血缘关系的汉族个体，男性102例，女性133例;年龄34～71岁，中位年龄50岁。均签署知情同意书。两组年龄、性别、吸烟和饮酒方面保持均衡可比。

1.2 DNA提取 采用酚/氯仿抽提、无水乙醇沉淀法提取外周血基因组DNA，-20℃备用。

1.3 IGF2R基因多态性的检测 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reation-restriction fragment length polymorphism，PCRRFLP)方法确定codon 901和codon 2020基因型。引物设计由上海生工公司合成。codon 901:上游引物 5’-CACCAGGCGTTTGATGTTGG-3’，下游引物5’-CTCCAGCAAGGACCTGACTTTC-3’，扩增片段长度91 bp;codon 2020:上游引物5’-CGGCTGCTCTCCTCTCTCA-3’，下 游 引 物 5’-AAAGAGCCAACCATCGTCAAG-3’，扩增片段长度134 bp。PCR反应体系为20 μl，包括 100 ng模板 DNA，1 ×Go Taq反应缓冲液，0.8 mmol/L Dntp，0.5 μmol/L 上、下游引物，1.0 U Taq DNA聚合酶。反应条件为95℃ 3 min，95℃ 30 s，65℃ (codon 901)和 62℃ (codon 2020)50 s，72℃延伸1 min，共38 个循环;72℃延伸10 min。取15 μl PCR产物，分别用限制性核酸内切酶(NEB公司)共同温浴(60℃)过夜，酶切产物通过2.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型。

1.4 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件进行统计学处理。采用 χ2检验分析 codon 901和 codon 2020的基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，采用非条件Logistic回归模型，在校正混杂因素后，计算比值比(OR值)及95%可信区间(95%CI)，评价基因型与胃癌之间的相关性。所有的统计检验均为双侧检验，P≤0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病例组和对照组一般人口学特征的比较 两组年龄、性别、有无吸烟和饮酒方面差异均无统计学意义(P＞0.05，表1)，具有可比性。

表1 两组人群的一般人口学特征［n(%)］

2.2 IGF2R基因多态性与胃癌患病风险的相关性

Codon 901与codon 2020基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)，见表2。在校正年龄、性别、吸烟史、饮酒史等混杂因素后，采用多因素Logistic回归分析，病例组codon 2020基因型AG、GG分布频率显著低于对照组，且携基因型AG、GG者胃癌发病风险分别是携AA者的0.65倍(95%CI:0.38～0.89，P＜0.05)和0.72倍(95%CI:0.45～0.91，P＜0.05)。将 AG、GG 基因型合并计算，则其胃癌发病风险是AA基因型的0.68倍(95%CI:0.45～0.91，P＜0.05)。Codon901位点等位基因和基因型在两组间分布的差异无统计学意义(P＞0.05)。

表2 IGF2R基因多态性与胃癌易感性的相关性［n(%)］

3 讨论

IGF2R基因定位于6q26，全长约136 kb，含有48个外显子，是阳离子依赖的细胞膜受体，选择性地与细胞外促有丝分裂的IGF2结合，通过细胞吞噬作用将血液循环中多余的IGF2清除。IGR2R还可与细胞内负生长调节因子TGF-β1的前体pro-TGF-β1结合使之成为有活性的TGF-β1。因此IGF2R的缺乏或结构缺陷会引起IGF2水平增高，降低TGF-β1的水平。这些分子效应会促进细胞增殖，使细胞逃避凋亡，并促进浸润和转移。近年来研究显示，IGF2R与多种肿瘤的发生密切相关，Oka Y等［2］发现在肝细胞癌中IGF2R基因座位有高频率的杂合性缺失(LOH)，并且在相当比例的存留等位基因中存在点突变。在绒膜癌、结肠癌、胶质瘤等恶性肿瘤中也有一定比例的存留IGF2R基因的突变。因此IGF2R是潜在的肿瘤抑制基因。

人群中IGF2R基因DNA序列存在多态性，这种多态性改变可能修饰基因表达和(或)功能，从而与肿瘤遗传易感性有关。Savage等［3］报道，IGF2R基因多个SNP与骨肉瘤的发病风险有关。Kong FM等［4］的研究结果也表明，肺鳞状细胞癌中常见M6P/IGF2R突变。本研究表明，codon 2020基因多态性与胃癌的发生显著相关，病例组等位基因(G)频率显著低于对照组(P＜0.05);与AA基因型相比，AG和GG基因型的罹患胃癌风险分别降低至0.65倍和0.72倍;将AG、GG基因型合并计算，则其胃癌发病风险是AA基因型的0.68倍。这些研究结果提示codon 2020基因型AG和GG能显著降低胃癌的发病风险。朱忠政等［5］在对IGF2R基因与结直肠癌和肝癌遗传易感性的相关性研究发现，IGF2R 2020Ser能显著降低结直肠癌和肝癌的发病风险，IGF2R基因2020Ser等位基因是中国人群重要的结直肠癌和肝癌的遗传保护分子。IGF2R 2020多态性改变在肿瘤发生中的确切作用及机制尚不清楚。Zhong等［6］报道，codon 2020位于胞外区15个部分重复结构域中的第14个结构域内。目前结构域14的生物学功能尚不清楚，因此有关codon 2020基因多态的功能学研究值得进行。本研究结果还显示，Codon 901位点等位基因和基因型在两组间分布的差异无统计学意义(P＞0.05)。提示codon 901与胃癌的患病风险无明显关联。

总之，IGF2R codon 2020多态性与胃癌的易感性明显相关，2020 G等位基因是中国人群重要的胃癌遗传保护分子，可作为胃癌发病风险的筛选指标。

［1］ Hébert E.Mannose-6-phosphate/insulin-like growth factor receptor expression and tumor development［J］.Biosci Rep，2006，26：7-17.

［2］ Oka Y，Waterland R A，Killian J K，et al.M6P/IGF2R tumor suppressor gene mutated in hepatocellular carcinomas in Japan［J］.Hepatology，2002，35：1153-1163.

［3］ Savage S A，Woodson K，Walk E，et al.Analysis of genes critical for growth regulation identifies insulin-like growth factor 2 receptor variations with possible functional significance as risk factors for osteosarcoma［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2007，16：1667-1674.

［4］ Feng-Ming Kong，Mitchell S Anscher，Mary Washington，et al.M6P/IGF2R is mutated in squamous cell carcinoma of the lung［J］.Oncogene，2000，19(12)：1572-1578.

［5］ 朱忠政，丛文铭，Hou Li-fang，等.IGF2R基因多态性与结直肠癌和肝癌遗传易感性的相关性研究［J］.2008，29(11)：1289-1292.