李 忠 凌宏通 王志达 曾振基

（广东省梅州市微生物研究所，广东 梅州 514071）

灵芝优良菌株的品比试验*

李 忠 凌宏通 王志达 曾振基

（广东省梅州市微生物研究所，广东 梅州 514071）

通过对4个灵芝菌株在拮抗反应、菌丝生长状况、生育期、子实体农艺性状及产量等方面进行对比试验，筛选出适合梅州生产推广的优良菌株：大别山G8菌株与其他菌株均有拮抗反应；该菌株母种和原种菌丝生长速度较快，菌丝洁白浓密，边缘整齐；在栽培过程中生长良好，孢子粉产量高，生物学效率高。

灵芝；菌株；拮抗试验；性状比较；筛选

灵芝（Ganoderma lucidum）属于担子菌纲多孔菌目多孔菌科灵芝属，是中国传统的药用真菌，被称为神草，在我国已有2 000多年的药用历史［1］。灵芝中含有灵芝多糖、三萜类化合物、核苷、氨基酸、甾醇、生物碱等多种成分[2～4]。大量药理研究表明，灵芝具有调节免疫、抗肿瘤、抗衰老、护肝和降血糖血脂等方面的功效[2～7]；临床上还应用于美容、改善记忆和改善睡眠[2，8]。灵芝市场需求量大，开发前景广阔。通过对4个引进的灵芝菌株的品比试验，筛选出适宜广东梅州及周边地区栽培的灵芝菌株。

1 材料与方法

1.1 供试菌株 供试菌株杂交灵芝、广1号灵芝引自广东省农科院蔬菜研究所，大别山G8灵芝引自广州宝兴生物科技有限公司梅州灵芝实验基地，三明京大灵芝引自福建省三明真菌研究所。

1.2 培养基配方 母种培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，琼脂20 g，水1 000 mL。原种培养基：玉米粒99％，石膏1％。栽培料配方：木屑78％，麦麸12％，玉米粉8％，石膏1％，蔗糖1％。

1.3 母种制作 取200 g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1 000 mL煮沸20 min，纱布过滤，再加20 g葡萄糖和20 g琼脂及其他药品，充分溶解后补足水至1 000 mL，分装于21×200（mm）试管中，每试管约10 mL。试管121 ℃灭菌30 min后取出摆斜面至冷却。在超净工作台内定量接入平板尖端菌丝，每个菌株接10支试管，25 ℃下恒温培养。

1.4 原种制作 玉米粒除杂、除坏后，在水中浸泡12～13 h，经沸水煮至用手按开玉米粒里面不糊为宜，晾干至表面无水，加入石膏拌匀，混合装袋，每袋折合干料80 g，121℃灭菌1.5 h。冷却后在超净工作台内定量接入平板尖端菌丝，每个菌株接20瓶，25 ℃恒温培养。

1.5 栽培方法 木屑78％，麦麸12％，玉米粉8％，石膏1％，蔗糖1％混匀，按料水比1∶1.5加水拌匀，拌好后分装到33×17×0.005（cm）的聚丙烯塑料袋中，每袋装折合干料350 g，121 ℃灭菌2 h。自然冷却后在超净工作台内定量接入原种，每个菌株接50袋，重复3次，室温培养。菌丝满袋后开袋，待菌盖白色生长圈基本消失呈红褐色时移入收粉架，保证湿度、定期通风，约40天后采收孢子粉和子实体[9，10]。

1.6 拮杭试验 拮抗试验是鉴定菌株间遗传差异的传统方法，通过拮抗试验将供试菌株进行鉴定、归类，防止重复[11]。菌丝间的拮抗反应是菌株间不同遗传特性的重要表现，表明不同菌株分别属于不同的亲和群。试验将0.5 cm2的菌块接种到PDA平板上，25 ℃下恒温培养5～8天得到活化菌种。在活化后的菌落边缘取直径5 mm的菌块，将3个菌株以“品”字形同时接种在一个PDA平板上，25 ℃恒温培养，每天定时观察菌株间是否有拮抗线，以及拮抗线是否明显。每个组合重复3次。

1.7 观测结果 母种萌发后每天划线，测量并记录菌丝生长速度，记录菌丝长满试管的时间以及菌丝的浓密程度、颜色、气生菌丝量等。原种待菌丝长到瓶肩部时开始沿菌丝生长边缘划线，测量并记录菌丝生长速度、满瓶时间以及菌丝的浓密程度等。栽培中观察记录原基形成时间、采收时间，以及子实体的生物学性状，包括菌盖颜色、菌盖面积、菌柄长度及出芝产量，计算污染率、生物学效率等，并对产量进行差异显著性测定。灵芝孢子粉作为灵芝的精华，集中了灵芝的最有效成分［12］。有鉴于此，梅州赤灵芝栽培以采收孢子粉为主、子实体为辅。试验中只测第一潮灵芝产量。

2 结果与分析

2.1 菌株拮抗性 拮抗试验表明，供试菌株接种在同一平板上培养6天后开始有拮抗线出现，但反应强烈程度不一。以杂交灵芝与其他菌株的拮抗反应最为强烈，说明亲缘关系最远；其他菌株间也都存在不同程度的拮抗反应，从中推测4个灵芝菌株亲缘关系较远，分属于不同亲和群，是不相同的灵芝菌株，不存在异名同种的问题。

2.2 母种、原种生长情况 由表1可以看出，4个灵芝菌株在母种及原种培养基上的生长速度各不相同，其中杂交灵芝长速较快，满管和满瓶天数较短，其次是广1号；供试菌株三明和G8生长速度相差不大，满管和满瓶天数基本保持同步。从菌丝密度色泽、菌丝边缘整齐度来看，4个菌株在母种和原种培养基的差别都不大，表现为菌丝浓密，颜色雪白，边缘较整齐。此外，各菌株在原种培养基中的菌丝萌发和定植能力均较强。总体来看，以杂交灵芝菌株在母种和原种培养基中的生长状况最好。

2.3 试验结果

（1）栽培袋菌丝培养情况。根据广东梅州当地大规模栽培赤灵芝的实际情况看（试验在自然气温下进行），因正值冬季，气温较低，生长相对较慢。4个菌株菌丝满袋所需天数依次为杂交＜广1号＜G8＜三明（表2）。与母种培养基菌丝满管天数次序相同，只是三明菌株长速较慢。污染率方面看，杂交菌株较低，仅1.65％，其他菌株的污染率也都在正常范围5％内。

（2）子实体生物学性状。由表2可知，杂交灵芝菌株的子实体农艺性状相对较差：颜色较淡，分支数多、菌柄长且直径小，菌盖呈近圆形且不规则，畸形率高达46.15％，产孢子粉量少。而其他3个菌株间子实体特性多差异不大，均呈红褐色，分支数1～2个，丛生，肾形，菌柄短，菌盖边缘规整；但在子实体大小、厚度、畸形率、产孢量方面有不同。

（3）产量及生物学效率。根据梅州栽培赤灵芝的第一潮子实体和孢子粉所作统计结果，并经多重比较Duncan测验法进行差异分析，三明和广1号两者之间的总鲜重无显著差异，但与G8、杂交菌株间存在极其显著差异（表3）。同时，无论是子实体还是孢子粉，G8产量均明显高于其他菌株，其生物学效率高达13.94％；生物学效率最低的是杂交灵芝，仅6.50％。据此得出，G8是适宜梅州气候条件下栽培的高产菌株。

表1 4个灵芝菌株在母种及原种培养基上的生长情况

表2 4个灵芝菌株栽培袋培养菌丝的生长情况及子实体农艺性状

表3 4个灵芝菌株的产量及生物学效率

3 讨论与小结

通过试验可以看出，杂交灵芝菌株进行母种、原种和栽培袋培养时菌丝生长速度均较快，菌丝活力和适应性较强，栽培袋污染率低；但其子实体菌盖的增大和加厚不充分，畸形率高，生物学效率低。这可能与菌株本身是杂交而成的有关系。而杂交菌株生长周期短，污染率低，菌盖不规则这一特性则适合于做盆景。

菌株广1号较G8菌丝生长快、污染率低，但生物学效率偏低，子实体虽然大但厚度不够，孢子粉产量也偏低；三明菌株虽然子实体菌盖最大，产孢量也较多，但菌丝长速较慢，生物学效率较低，说明菌株广1号和三明都不是高产优良菌株。

菌株G8母种和原种菌丝长速比三明快，菌丝白而密，气生菌丝量多，子实体原基形成快，菌盖虽略小但厚实，出芝较整齐，子实体形状和色泽好，产孢量多，生物学效率高，具有较高的商品价值。

综上所述，供试的4个灵芝菌株中，G8是较适宜梅州地区生产推广的优良菌株。

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［10］曾振基，古培总，陈东标，等．赤灵芝高产栽培技术［J］．广东农业科学，2004（2）：44-45．

［11］郭晓帆，陈艳秋．桦褐孔菌不同菌株的生物学特性研究［J］．食用菌，2007，29（1）：14-16．

［12］赵东旭，徐建兰．灵芝孢子研究进展［J］．中草药，1996，30（4）：306．

∗项目来源：广东省科技厅产学研引导项目（2010B090300040）；广东省促进科技服务业发展项目（2011B040100013）。

李忠（1983- ），男，广东五华人，硕士，农艺师，主要从事农业微生物等方面的研究。