郭培果

贵阳济仁堂药业有限公司，贵州 贵阳 550005

RP－HPLC法测定裸花紫珠颗粒中芦丁的含量

郭培果

贵阳济仁堂药业有限公司，贵州 贵阳 550005

目的：建立裸花紫珠颗粒中芦丁的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Hpersil C18柱，流动相为乙腈－1%醋酸溶液（15∶85），流速为1.0ml·min－1，检测波长为257nm，柱温为40℃。结果：芦丁进样量在551.8～5518ng（r＝0.9999）范围内线性关系良好，平均加样回收率为99.09%，RSD为0.90%（n＝6）。结论：该方法简便，准确可靠，重复性好，可用于裸花紫珠颗粒中芦丁的含量测定。

裸花紫珠颗粒；芦丁；反相高效液相色谱法；含量测定

裸花紫珠颗粒系由收载于《中药成方制剂》第6册的“裸花紫珠片”改剂型而成的新品种［1］，由裸花紫珠提取加工而成，具有收敛止血的功效。用于肺喀血及消化道出血。为了更好的控制药品质量，参考相关文献［2～6］，进行了色谱条件优化和方法学考察。结果表明，该方法快速简便、准确可靠、重复性好、可用于裸花紫珠颗粒中芦丁的含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－10ATVP高效液相色谱仪，SPD－10AVP紫外检测器；威玛珑色谱数据工作站（南宁威玛龙色谱科技有限公司）；CTO－10ASvp色谱柱恒温箱（日本岛津）；UV－1750型紫外可见分光光度计。

1.2 试药 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100110－200707，供含量测定用）；裸花紫珠颗粒试验用样品由贵阳济仁堂药业有限公司研制；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hpersil C18（250×4.6mm，5um）；流动相：乙腈－1%醋酸溶液（15∶85）；流速：1.0ml· min－1；检测波长：257nm；进样量：10ul；柱温：40℃。

2.2 系统适用性试验 按拟定的标准条件进行测定，结果理论板数按芦丁峰计＞4000；芦丁其它杂质峰的分离度R＞1.5。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1m l含0.2mg的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品粉末0.2g，精密称定，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）45min，取出，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得。

2.3.3 阴性对照溶液的制备 取处方中除裸花紫珠外的其他辅料，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺裸花紫珠的阴性样品，照“2.3.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.4 方法专属性考察 分别吸取对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液各10ul，注入HPLC仪，色谱见图1。由图1可见，阴性对照在与对照品相同的保留时间位置，无相应的色谱峰出现，表明除裸花紫珠外辅料对测定无干扰。

2.5 线性关系的考察 精密吸芦丁对照品贮备液（浓度为1.1036mg·ml－1）0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、5m l置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，精密吸取上述溶液各10ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，以峰面积为纵坐标，进样量（ng）为横坐标绘制标准曲线，芦丁回归方程为：y＝831.563X－4.612（r＝0.9999）。结果表明，芦丁在进样量为551.8～5518ng（r＝0.9999）范围内具有良好的线性关系。

拟合成过原点的直线方程为Y＝831.561X，将线性关系考察的最低进样量与最高进样量分别代入上述2个方程进行计算，所得峰面积相对偏差0.00012%（低）～0.00005%（高）。由此可作截距，近似为零，故采用外标一点法计算芦丁含量。

2.6 精密度试验 精密吸对照品溶液适量，重复进样测定6次，每次10ul。结果，以芦丁的峰面积计，RSD＝0.05%，表明方法精密度好。

2.7 重复性试验 取批号为110301的样品6份，按“2.3.2”项下方法制备样品溶液，并进行测定，考察测定方法的重复性。结果，芦丁的平均含量为27.465mg·g－1，RSD＝0.22%，表明重现性良好。

2.8 稳定性试验 取样品（批号为110301）适量，依“2.3.2”项下方法制备样品溶液，室温下分别于0、1、2、4、6、8、10h进样测定，考察芦丁在室温下的溶液的稳定性。结果，RSD＝0.76%，表明样品在10h内稳定。

2.9 加样回收率试验 取批号为110301样品（含量为27.465mg·g－1）适量，混匀，取样品约0.1g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入芦丁对照品溶液（0.22072mg·ml－1），按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.10 样品含量测定 取本品10批，按“2.3.2”项下方法处理后，测定含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 波长的选择 取芦丁对照品适量，加50%甲醇稀释成一定浓度的溶液，用UV－1750型紫外可见分光光度计进行扫描，芦丁在258.0nm处有最大吸收，参照相关资料［3］，将检测波长定为257nm。

3.2 提取溶剂的选择 本研究曾对甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇提取用溶媒进行选择，结果，50%甲醇提取液效果最好，故确定以50%甲醇为提取溶剂。

3.3 提取方法的选择 参照有关资料，对提取方法进行了比较试验，用同一批样品（批号：110301）以不同的提取方法和相同的溶剂测定。结果，采用超声处理（功率250W，频率50kHz）芦丁含量较高；对超声处理时间15、30、45、60min进行考察，结果发现45min提取含量最高。3.4 流动相的选择 试验中，考察了乙腈－1%醋酸溶液、甲醇－1%冰醋酸溶液、乙腈－甲醇－0.1%冰醋酸溶液等多个流动相系统进行比较。结果表明：流动相以乙腈－1%醋酸溶液（15∶85）较好，保留时间适当，芦丁峰与其它杂质峰能较好分离，故将流动相确定为乙腈－1%醋酸溶液（15∶85）。

3.5 色谱柱的选择 本研究曾考察了3种色谱柱（Thermo C18柱（250×4.6mm，5um）、Hypersil C18柱（250× 4.6mm，5um）、Diamons C18（250×4.6mm，5um））对芦丁的分离情况。结果以Hypersil C18效果最佳，故最终选择了Hypersil C18色谱柱。

［1］卫生部药品标准.中药成方制剂［S］.第6册.1992：199.

［2］国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编［S］.内科气血津液分册，2002：41.

［3］中国药典2010年版［S］.一部.2010：333.

［4］中国药典2010年版［S］.一部.2010：469.

［5］中国药典2010年版［S］.一部.2010：820.

［6］宾婕，刘洁，陈克嶙，等，不同来源苦荞中芦丁和槲皮素含量测定［J］.现代食品科技，2011（1）.

R282.71

A

1007－8517（2013）07－0027－02

2013.02.21）

郭培果（1978～），男，布依族，执业药师。

郭培果，执业药师，Tel：0851－5400121－8804，E－mail：guozdq＿888＠163.com。