不同产地西红花开花与有效成分含量研究

2012-12-24徐象华施林妹潘永年

浙江农业科学 2012年12期

徐象华，施林妹，朱波，潘永年

(1.浙江省丽水市农业科学研究院，浙江丽水 323000;2.丽水职业技术学院，浙江丽水 323000)

西红花 (Crocus sativus L.)系鸢尾科番红花属植物，花柱上部及柱头入药，被称为植物黄金，具有活血化瘀，凉血解毒，解郁安神等功效［1-3］。目前西红花栽培品系混杂、品质差、产量低，筛选品质好、产量高的优良适栽品系意义重大。本试验旨在研究产地对西红花有效成分与开花的影响，以期为优良品系筛选提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料与仪器

2011年7月收集青田、建德、海门、南汇4个产地西红花资源，精心挑选种球，剔除小种球(＜15 g)与病害种球。试验设在丽水市莲都区百果园试验基地。

试验仪器与试剂:Waters1525高效液相色谱仪(美国Waters公司)，SWB5200型超声清洗机 (上海必能信超声有限公司)，Milli-QAcademic超纯水仪 (美国 Millipore公司)，FA1104分析天平 (上海天平仪器厂)。对照品购于国药集团化学试剂有限公司，水为去离子水，其他试剂为分析纯。

1.2 观察方法

1.2.1 立地条件观察

调查莲都百果园、遂昌云峰与缙云南弄3个基地立地条件，包括海拔高度、经纬度、年平均温度等，观察记录3个基地西红花种球出芽与开花情况。

1.2.2 开花情况与花朵性状观察

统计上架种球个数，称量上架种球总重量，观察4个产地西红花种球开花情况，统计每天开花数，称量花朵总鲜重与柱头总干重，计算折干率(柱头总干重/花朵总鲜重)。

1.3 西红花苷含量测定

1.3.1 色谱条件

色谱柱 Agligent eclipse XDB-C18(5 μm，4.6 m×150 mm)，流动相为甲醇∶水 (48∶52)，流速1.0 mL·min-1，检测波长440 nm，柱温30℃，进样量 10 μL。

1.3.2 对照品溶液的制备

精密称取对照品西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ，置于25 mL棕色容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，得浓度为0.312 mg·mL-1西红花苷Ⅰ和0.158 mg·mL-1西红花苷Ⅱ对照品溶液。

1.3.3 供试品溶液的制备

取本品粉末约10 mg，置25 mL棕色容量瓶中，加乙醇适量，超声处理30 min，放至室温，加乙醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔膜滤过备用。

1.3.4 标准曲线与线性关系

取西红花苷Ⅰ (0.312 mg·mL-1)和西红花苷Ⅱ (0.158 mg·mL-1)的混合对照品溶液，移取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL置于10 mL棕色容量瓶中，加乙醇稀释，在1.3.1色谱条件下测定。分别以西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ对照品溶液的质量浓度为纵坐标Y，峰面积为横坐标X绘制标准曲线。求得西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ线性范围分别为 3.118 ～31.178 μg·mL-1及 1.579 ～15.792 μg·mL-1，回归方程及相关系数分别为 Y=0.016 1X+0.314 4，R2=0.999 8;Y=0.011 2X+0.193 9，R2=0.999 5。1.3.5 精密度试验

取同一标准品，在1.3.1节色谱条件下连续进样5次，测得西红花苷Ⅰ的色谱峰面积RSD=0.38%，西红花苷Ⅱ的色谱峰面积RSD=1.06%，表明仪器精密度良好。

1.3.6 重复性试验

取同一样品5份，按1.3.3节供试品的制备操作，1.3.1节的色谱条件测定含量。西红花苷Ⅰ的平均RSD为2.19%，西红花苷Ⅱ的平均RSD为3.98%。

1.3.7 稳定性试验

取某样品制备供试品溶液，置于室温避光保存，分别于 0，1，2，4，6，8，12，24 h进样，测定峰面积，计算得西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ峰面积的RSD(n=8)分别为1.61%和1.60%，表明供试品溶液室温保存24 h内稳定。

1.3.8 加样回收率试验

取某已知含量样品9份，各5 mg，精密称定，分低、中、高3组，每组3个，分别加入西红花苷Ⅰ (0.312 mg·mL-1)和西红花苷Ⅱ (0.158 mg·mL-1)的混合对照品溶液1.07，1.39，1.64 mL，按照1.3.3节供试品的制备操作，制成所需溶液;依照1.3.1节的色谱条件，进样测定，计算回收率。结果西红花苷Ⅰ的平均回收率为101.4%，RSD为1.41%，西红花苷Ⅱ的平均回收率为96.6%，RSD为0.90%。

2 结果与分析

2.1 立地条件对西红花出芽与开花的影响

温度是影响植物生长与开花的主导因素，试验地的纬度与海拔对温度影响最大［4］。西红花性喜气候温和、空气湿润、光照充足环境条件，开花适温16～20℃［5］。高海拔地区种球大田生长期长，种球养分更充足，有利于提高笠年新种球产量。从开花角度看，贮藏期所选基地应尽量位于中高海拔地区。

影响开花因素主要是海拔，海拔越高，温度越低，开花时间越早。3个试验地中，缙云南弄基地海拔最高，夏季室内最高温度仅为26℃，西红花出芽与开花时间最早，分别在8月30日与10月5日;莲都与遂昌基地西红花出芽与开花时间稍慢，较缙云基地晚约15 d，西红花出芽时间与开花时间规律大体一致，出芽35～40 d后花朵陆续开放(表 1)。

2.2 不同产地对西红花开花的影响

西红花在浙江生长至10月下旬开始开花，初花期延续到11月上旬，11月中下旬陆续进入盛花期。4个不同产地的西红花开花时间不尽相同 (表2)。

表1 不同立地条件与西红花出芽开花的关系

表2 不同产地西红花开放时间和开花数量

由表2可知，4个产地中，青田与建德西红花开花时间最早，分别在10月23日与10月24日就有花朵开放，海门与南汇西红花开花稍晚，最早开花时间在10月30日。

高温影响西红花开放，容易导致花朵萎缩，11月5-6日温度均在23℃以上，导致11月5-9日期间，花朵出现较多萎蔫，高温不仅影响当天花朵开放，对后几日开花亦造成严重影响，是导致花朵萎蔫的主要因素。花朵萎蔫影响西红花有效成分含量［6-7］，增加了日后采摘工作量，浙产西红花在进入11月初花期后，室内温度必须控制在20℃以下，直至所有花朵完全开放。

2.3 不同产地西红花性状比较

不同产地西红花开花性状存在差异 (表3)。建德西红花种球平均重量、开花总数、花朵总鲜重、柱头总干重与单位种球开花数均最高，分别为28.9 g，4 099朵，180.4 g，37.30 g与 157.6朵，南汇种球折干率与单位种球柱头干重数值最高，折干率达22.3%，单位种球柱头干重为1.50 g，海门种球开花性状表现一般，青田种球开花性状表

表3 不同产地西红花开花性状比较

现最差，折干率仅为19.1%，单位种球柱头干重仅为0.72 g。

2.4 不同产地西红花总苷含量测定

2.4.1 样品含量测定

取11批不同产地的西红花样品22份各10 mg，每批2份，分别按照1.3.3节供试品的制备操作，制成供试品溶液，依照1.3.1节的色谱条件进行HPLC分析，按照外标法以峰面积计算，含量测定结果见表4。

表4 不同产地西红花有效成分含量比较

2.4.2 不同产地西红花有效成分含量比较

浙产西红花有效成分含量均满足药典要求［1］，平均总西红花苷含量为15.247%，不同产地西红花西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ与总苷含量均存在极显著差异 (P＜0.01)(表4)。海门西红花西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ与总苷含量均最高，分别为13.314%，4.139%与17.453%，总苷含量是其他产地西红花的1.11～1.27倍。建德西红花有效成分含量最低，总苷含量仅为13.716%。从有效成分含量看，浙产西红花有效成分含量高，满足药典西红花总苷含量不得少于10.0%的要求，为进一步筛选适栽品系奠定了基础。