陈艳珍，宋新华

（山东理工大学生命科学学院，山东 淄博 255049）

黄秋葵（Okra，Hibiscus esculentus L.），又名秋葵，羊角豆等，属锦葵科秋葵属一年生草本植物，黄秋葵果实中含有丰富的多糖、矿物质和黄酮类化合物等，具有一定的保健功能[1-4]。但有关黄秋葵果实粉（OFP）增强免疫力和抗疲劳研究国内外尚鲜见报道。本研究探讨OFP对衰老小鼠免疫和抗疲劳能力的影响，为黄秋葵的进一步开发利用提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与主要仪器

D-半乳糖：美国Sigma公司生产；甘油三酯（TG）、血糖（GlU）、总胆固醇（TC）测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。TGL-18C-C高速台式离心机：上海安亭科学仪器厂；722分光光度计、FC204电子天平：上海精密科学仪器有限公司；HWS-26型数显恒温水浴锅：上海一恒科技有限公司；UV755B紫外-可见分光光度计：上海分析仪器总厂。

1.1.2 动物分组与处理

昆明种小白鼠50只，体重（20±2）g，山东大学动物实验中心提供。用基础饲料（山东大学动物实验中心提供）喂养1周以适应环境。之后将小鼠随机分为5组，每组10只（雌雄各半）：正常对照组、衰老模型对照组均饲喂基础饲料，低剂量组、中剂量组和高剂量组饲喂用黄秋葵果实粉（淄博济世保健食品科技有限公司提供）替代等量基础饲料的试验饲料（替代量依次为 32.00、64.00、128.00 g/kg）。除正常组外，其余各组均每日颈背部皮下注射400 mg/kg·bw的D-半乳糖0.2 mL（D-半乳糖以灭菌生理盐水配置），正常组注射等量生理盐水，每天定时注射，连续56 d。小鼠同室分笼饲养（每笼5只），保持卫生清洁、光照充足，自由采食和饮水。每天进行常规观察，包括动物外观、体征、行为活动等，每周称体重一次，根据小鼠体重变化调整注射量。

1.2 测定指标及方法

1.2.1 黄秋葵果实粉主要成分分析方法

水分，105℃热失重法；蛋白质，凯氏定氮法；脂肪，乙醚索氏提取法；灰分，高温灰化法；粗多糖，水提醇沉法[4]；总黄酮，甲醇索氏提取，芦丁测定含量[5]。

1.2.2 抗疲劳试验[6]

负重游泳试验：小鼠连续灌喂49 d，灌胃30 min后，每只小鼠尾根部按小鼠体重5%负荷铅丝，将小鼠置于水深30 cm、水温（25±1）℃的水槽内自由游泳，用秒表记录小鼠自落水至鼻孔沉入水中8 s不能浮出水面的时间，为小鼠游泳时间。

血清尿素氮含量的测定：负重游泳的小鼠休息60 min后眼底采血0.5 mL，采用二乙酰-肟法测定。

肝糖原的测定：实验56 d后，小鼠颈椎脱臼法处死，准确称取肝脏200 mg，采用蒽酮比色法测定。

1.2.3 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞和免疫器官指数的测定[6]

于实验末日禁食12 h，灌胃30 min后称重，每鼠腹腔注射5%压积的鸡红细胞（CRBC）悬液0.8 mL进行免疫，眼底采血、离心分离血清，待测生化指标。小鼠颈椎脱臼处死，采用滴片法测定巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。剥取脾脏、胸腺，去除脏器周围的脂肪和结缔组织，用1/100电子天平称其湿重，计算免疫器官指数。

吞噬率（%）=吞有CRBC的巨噬细胞数/100个巨噬细胞×100吞噬指数=吞噬的CRBC总数/100个巨噬细胞免疫器官指数＝脏器重量（mg）/小鼠体重（10 g）

1.2.4 血清生化指标的检测

血清中血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）的含量均按试剂盒说明书方法测定。

1.2.5 数据统计分析

2 结果

2.1 黄秋葵果实粉主要成分

经测定，黄秋葵果实粉中主要成分的重量百分比（%）为：蛋白23.31，脂肪24.00，灰分 5.97，水分 5.96，粗多糖1.24，总黄酮1.98，以上各值均为3次平行试验分析的均值。

2.2 一般情况

饲养56 d后，各剂量组、模型组增重与正常组比，差异显著（P<0.05）；各剂量组间以及各剂量组与模型组间体重均无显著差异（P＞0.05），但从外表观察，各剂量组和正常组小鼠皮毛光滑，精神状态较好；而模型组小鼠皮毛粗糙，精神状态较差；各组间进食量均无显著性差异，说明给予黄秋葵果实粉没有影响进食情况。

2.3 黄秋葵果实粉对机体抗疲劳作用的影响

黄秋葵果实粉对机体抗疲劳作用的影响，见表1。

表1 黄秋葵果实粉对机体抗疲劳作用的影响Table 1 The effect of Okra fruit powder on anti-fatigue of aged mice（，n=10）

注：与模型组相比较，a：P＜0.05，b:P＜0.01。

肝糖原/（mg/g）正常组 500.82±46.66b 8.26±2.12a 4.98±0.81a模型组 325.22±62.52 12.89±3.36 3.02±0.62低剂量组 406.85±68.03 10.32±2.73 3.78±0.59中剂量组 448.69±61.70a 9.46±2.58a 4.56±0.43a高剂量组 430.28±60.72a 9.57±2.39a 4.34±0.76a组别 负重游泳时间/s血清尿素氮/（mmol/L）

对小鼠负重游泳时间、血清尿素氮和肝糖原含量进行测定，模型组与正常组各指标均存在显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。与模型组相比，各剂量组血清尿素氮含量均有不同程度下降；负重游泳时间和肝糖原含量均有一定程度升高。结果表明，低剂量组可降低小鼠血清中血清尿素氮含量及提高负重游泳时间和肝糖原含量，但无统计学意义；中、高剂量组负重游泳时间和肝糖原含量明显高于模型组（P＜0.05），尿素氮含量显著低于模型组（P＜0.05）。

2.4 黄秋葵果实粉对小鼠免疫指标的影响

黄秋葵果实粉对小鼠免疫指标的影响，见表2。

表2 黄秋葵果实粉对小鼠免疫指标的影响Table 2 Effect of Okra fruit powder on the immunity index of aged mice(,n=10）

表2 黄秋葵果实粉对小鼠免疫指标的影响Table 2 Effect of Okra fruit powder on the immunity index of aged mice(,n=10）

注：与模型组相比较，a：P＜0.05，b:P＜0.01。

组别 胸腺指数 脾脏指数 吞噬率/% 吞噬指数正常组 37.82±5.47b 52.88±8.52b 52.16±18.57a 0.67±0.06a模型组 28.55±3.82 39.67±9.34 39.91±12.26 0.35±0.04低剂量组 33.60±4.96 43.26±7.57 45.61±14.78 0.42±0.07中剂量组 35.26±3.88a 44.88±6.63a 48.74±16.16a 0.60±0.06a高剂量组 35.46±5.62a 46.71±8.79a 51.10±20.03a 0.63±0.08a

从表2可以看出，模型组与正常组比较，吞噬率、吞噬指数、胸腺和脾脏指数均存在显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。与模型组相比，各剂量组吞噬率、吞噬指数、胸腺和脾脏指数均有一定程度升高。结果表明，低剂量组可提高吞噬率、吞噬指数、胸腺和脾脏指数，但无统计学意义；中、高剂量组吞噬率、吞噬指数、胸腺和脾脏指数明显高于模型组（P＜0.05）。

2.5 黄秋葵果实粉对小鼠血液生化指标的影响

黄秋葵果实粉对小鼠血液生化指标的影响，见表3。

表3 黄秋葵果实粉对小鼠血液生化指标的影响Table 3 The effect of Okra fruit powder on the blood index of aged mice（,n=10）

表3 黄秋葵果实粉对小鼠血液生化指标的影响Table 3 The effect of Okra fruit powder on the blood index of aged mice（,n=10）

注：与模型组相比较，a：P＜0.05，b:P＜0.01。

组别TG/（mmol/L）GLU/（mmol/L）TC/（mmol/L）正常组 1.44±0.30a 0.57±0.07a 1.77±0.16a模型组 2.01±0.49 0.85±0.10 2.74±0.22低剂量组 1.85±0.26 0.79±0.06 2.60±0.16中剂量组 1.54±0.27a 0.77±0.07 2.24±0.13a高剂量组 1.82±0.22 0.81±0.04 2.38±0.18

从表3小鼠血清中TG、GLU、TC的测定数据可知，模型组与正常组各指标均存在显著性差异（P＜0.05）。与模型组相比，各剂量组血清中TG、GLU、TC的含量均有不同程度下降。结果表明，低、高剂量组可降低血清中TG、GLU、TC的含量，但无统计学意义；中剂量组血清中TG和TC含量明显低于模型组（P＜0.05），GLU含量低于模型组，但差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

常用的体力疲劳的评价方法主要有运动耐力实验和生化指标的检测。运动耐力实验是反映机体疲劳最直接、最客观的指标。在反映疲劳的生化指标中，血清尿素氮、肝糖原含量等生化指标的改变最具代表性，也是检测疲劳最常用的指标[6]。糖原是机体运动时能量的重要来源，它的多少直接影响运动能力，故肝糖原含量是检测保健食品抗疲劳作用的重要指标之一。运动后血清尿素氮的多少，提示机体利用蛋白质供能的多少，间接反映机体的疲劳程度[6]。本实验结果表明，衰老小鼠抗疲劳能力显著下降；秋葵果实粉可提高衰老小鼠负重游泳时间和肝糖原储备，降低衰老小鼠血清尿素氮含量，中、高剂量组效果显著（P＜0.05）。

免疫功能的衰退是机体衰老最明显的特征之一。胸腺是免疫系统的中心器官；脾脏是外周免疫器官，是体内最大的淋巴器官。机体内的免疫细胞大多数分布于胸腺和脾脏中，因此，胸腺指数和脾脏指数是衡量胸腺和脾脏功能的一项重要指标。巨噬细胞具有吞噬、杀伤、递呈抗原、分泌生物活性物质、调控局部组织微环境以及抑制肿瘤等多种免疫功能，是机体非特异性免疫的重要组成部分。本试验结果显示，衰老小鼠免疫功能显著下降；饲喂黄秋葵果实粉可提高衰老小鼠胸腺和脾脏指数，增强衰老小鼠腹腔巨噬细胞活性，中、高剂量组效果显著（P＜0.05）。

本实验对小鼠血清总胆固醇、甘油三酯、血糖含量测定结果表明，衰老小鼠血脂和血糖含量显著升高；饲喂黄秋葵果实粉可降低衰老小鼠血酯、血糖含量，中剂量组降血脂效果显著（P＜0.05）。

综上，黄秋葵果实粉能显著提高衰老小鼠免疫功能和抗疲劳作用。结合本实验前期对黄秋葵果实粉主要成分的检测，可以初步推论黄秋葵果实粉可能是通过其中含有的矿物元素、多糖和黄酮等，通过代谢途径提高机体免疫功能和抗疲劳作用。但目前国内外对黄秋葵果实粉生物活性的研究报道较少，发挥这一作用的主要物质基础还不很清楚，有待深入研究。

[1]刘娜.黄秋葵的综合利用及前景 [J].中国食物与营养,2007(6):27-30

[2]董彩文,梁少华.黄秋葵的功能特性及综合开发利用[J].食品研究与开发,2007,28(5):180-182

[3]李建华,陈珊.黄秋葵水提液抗疲劳的药效学观察[J].中国运动医学杂志,2004,23(2):196-197

[4]黄阿根,陈学好,高云中.黄秋葵的成分测定与分析[J].食品科学,2007,28(10):451-455

[5]方晴霞,金戈.黄秋葵中总黄酮的含量测定[J].医药导报,2004,23(9):675-676

[6]郑建仙.功能性食品（第三卷）[M].北京：中国轻工业出版社,1999：319-330,105-108