郭桂玲

（上海赛金生物医药有限公司 上海 201203）

中药复方制剂交通心肾胶囊由黄连，肉桂，益智，枸杞等13味中药材组成，具有交通心肾,补肾益精,精主安神的功效。用于心肾不交，肝肾阴虚所致的心悸不宁，虚烦不寐，多梦易醒，眩晕耳鸣，腰膝酸软，遇事善忘，五心烦热，神疲乏力，尿频等症。方中黄连为君药，其主要成分为盐酸小檗碱。目前其含量测定采用的是薄层色谱扫描法，但其样品处理时间较长，测定方法繁琐，重复性较差。采用HPLC法测定中成药中的盐酸小檗碱含量有较多文献报道[1-6]，为此，本文应用HPLC法[7]对交通心肾胶囊中盐酸小檗碱含量测定进行研究，以探索更加快捷，简便的质量控制方法。

1 仪器与试药

日本岛津公司LC-10 AVP高效液相色谱仪；德国赛多利斯BP211 D型电子分析天平；盐酸小檗碱对照品，批号：110713-200208（中国药品生物制品检定所）；交通心肾胶囊，规格：0.36 g/粒（上海××药业股份有限公司）；甲醇、乙腈均为一级色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

ODS C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈-水（3∶4，1.0 L中含磷酸二氢钾3.4 g和十二烷基硫酸钠1.7 g）；检测波长为345 nm；流速1.0 ml/min；柱温：30 ℃；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成0.05 mg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取交通心肾胶囊内容物适量，混匀，精密称取0.36 g，置100 ml量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）约95 ml，60 ℃水浴加热15 min，取出，超声处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 µm滤膜过滤，即得。

2.4 线性关系的考察[8]

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液4，8，12，16，20µl依次进样，按上述色谱条件测定，以进样量（X）对峰面积（Y）进行回归，求得回归方程为Y=4.2389 X+0.0146，r=0.999 8，表明盐酸小檗碱在0.2~1.0 µg之间的线性关系良好(图1)。

2.5 阴性对照试验

取缺黄连的群药按其质量标准制备阴性对照品，依样品测定项下的方法测定，结果在盐酸小檗碱对照品（图2）吸收峰位置处无干扰（图3）。

图1 盐酸小檗碱线性关系图

图2 盐酸小檗碱对照品色谱图

图3 阴性空白样品色谱图

图4 交通心肾胶囊供试品色谱图

2.6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10 µl重复进样5次，盐酸小檗碱对照品面积平均值为2 040 518，RSD为0.30%（表1）。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液常温放置，分别在0，0.5，1，3，6 h测定，结果平均峰面积为1 991 844，RSD为0.33%（表2）。

2.8 重复性试验

取同一样品，精密称取6份，按供试品溶液制备方法处理并测定，结果盐酸小檗碱的平均含量为12.29 mg/g，RSD为2.39%（表3）。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的交通心肾胶囊样品适量，加入盐酸小檗碱对照品溶液（0.466 mg/ml）3 ml，按供试品溶液制备方法处理并测定，计算回收率（表4）。

表1 盐酸小檗碱精密度试验测定结果

表2 交通心肾供试品溶液稳定性试验测定结果

表3 交通心肾中盐酸小檗碱重复性试验测定结果

表4 盐酸小檗碱加样回收率测定结果

2.10 供试品溶液制备方法的比较

原标准的供试品溶液制备方法（TLC法）取交通心肾胶囊内容物适量，混匀，精密称取0.36 g，置100 ml量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）约95 ml，60 ℃水浴加热15 min，取出，超声处理30 min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 µm滤膜过滤，即得。

修改后的供试品制备方法，超声处理后无需室温放置过夜，直接进行下一步的样品处理即可。

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 µl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定5批样品盐酸小檗碱含量（表5）。

表5 交通心肾胶囊中盐酸小檗碱含量测定结果（n=5）

2.11 供试品含量测定方法的比较

用新建立的HPLC方法与原标准TLC检测方法 3批交通心肾胶囊中盐酸小檗碱的含量分别进行测定，结果见表6。

表6 交通心肾胶囊中盐酸小檗碱含量测定比较结果（n=3）

3 讨论

本品原来所用TLC含量测定方法，在操作过程中受相对湿度、溶剂蒸汽、温度、展距等客观影响以及点样位置及点样体积等人为因素的影响，其自动化程度及重复性方面相对不高。通过HPLC法对交通心肾胶囊中盐酸小檗碱含量测定的研究，对其线性、精密度、稳定性、重复性进行考察，结果显示，HPLC法快速、简捷，有效的节约了操作时间，人为因素减少，自动化程度高，与原方法所测定数据相比较，具有较好的重复性，可以代替原方法用于该制剂的质量控制。

[1] 谢敏，柯雪红，陈彩英，等. 反相高效液相色谱法测定胃肠舒胶囊中盐酸小檗碱的含量[J]. 中药新药临床药理,2004, 15(2): 113-114.

[2] 黄捷,桑彤,覃红萍.反相高效液相色谱法测定金鸡胶囊中盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志,2002, 12(2): 20-21.

[3] 董钰明, 张树江, 陈晓峰, 等. HPLC测定天参胶囊中盐酸小檗碱的含量[J]. 兰州大学学报(医学版), 2006, 32(2): 50-52.

[4] 刘建华, 高玉琼, 刘莹, 等. 高效液相色谱法测定白连止痢胶囊中的盐酸小檗碱含量[J]. 药物分析杂志, 2006,26(12): 1863-1865.

[5] 林辉. HPLC法测定肾衰宁胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].海峡药学, 2006, 18(6): 63-64.

[6] 李建强, 孙清, 刘文义. HPLC法测定清胃泻火胶囊中盐酸小檗碱的含量[J]. 齐鲁药事, 2006, 25(9): 530-531.

[7] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010版二部[M].北京: 中国医药科技出版社, 2010: 29-31.

[8] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010版二部[M].北京: 中国医药科技出版社, 2010: 194-195.