李向阳 钱如林 蔡祖勋 贾向波

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，我国发病率和死亡率有明显增高的趋势。NS是一个P53结合蛋白，表达于干细胞、变异细胞和肿瘤，对维持干细胞和肿瘤细胞继续增殖起了重要的作用［1，2］。NS表达量的增高与多种恶性肿瘤的恶性程度相关，而在NSCLC中的表达情况尚不清楚。本研究采免疫组织化学SP法检测NS基因在NSCLC和癌旁正常组织中的表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 53例肺癌标本选自河南省胸科医院2009年3月至2010年6月手术切除并经病理证实的组织标本，鳞癌30例，腺癌23例。术前未行任何化疗、放疗。其中男31例，女22例，年龄37～76岁，平均年龄57岁。临床分期标准按国际抗癌联盟(UICC)TNM分期:Ⅰ期4例，Ⅱ期34例，Ⅲ期15例。按组织学分级为:高分化10，中分化25例，低分化18例;另取癌旁(＞4 cm)经病理证实的正常肺组织作为对照。

1.2 免疫组织化学 兔抗人FHIT多克隆抗体及SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。每例取原发灶癌组织、切缘正常组织，组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，分别进行HE染色和免疫组化SP法染色。免疫组化染色步骤严格按试剂盒说明进行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 11.0软件包进行统计分析，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05具体统计学意义。

2 结果

NS蛋白在NSCLC中的表达率为54.7%(29/53)显著高于癌旁正常组织中的表达率0%(0/15)(P＜0.05)。NS蛋白腺癌组织的表达率为65.2%(15/23)明显高于鳞癌组织的表达率46.7%(14/30)(P＜0.05);低分化组织的表达率77.8%(14/18)明显高于高、中分化组织的表达率42.9%(15/35)(P＜0.05)，与患者TNM分期及淋巴结转移无关(P＞0.05)。

3 讨论

肿瘤是正常细胞经过长时间、多阶段演变而形成的一种疾病，许多基因及其蛋白质产物参与了这个复杂的变化过程。研究发现NS通过对p53通路来调节细胞周期，进而影响细胞的增殖分化，用RNA干扰和杂合子基因敲出实验使NS的表达降低，就减少了细胞的增殖，加快细胞的衰老［3］，因此被认为是一个细胞增殖的重要调节因子。

最近一些研究已证实，在RNA和蛋白水平上，NS在多种肿瘤细胞系和原发癌上高表达，在定型终末分化细胞中不表达［4］。本研究显示NS蛋白在NSCLC组织中的表达明显高于癌旁正常组织。NS蛋白表达上调可能是NSCLC发生的早期事件，NS蛋白在NSCLC组织中表达的升高，使正常组织细胞恶性转化的能力增强，细胞发生癌变、增殖能力增强，导致肿瘤的发生。提示NS蛋白表达的减少在NSCLC的发生机制中可能起一定的作用，采用纤维支气管镜活检结合免疫组化技术检测NS蛋白有助于NSCLC的早期发现，从而提高NSCLC的早期诊断率。

本研究结果显示，NS蛋白的表达与NSCLC的分化程度相关，分化越低的组织，NS蛋白的表达率越高，低分化组织中NS蛋白高表达率明显高于高、中分化组织。由于肿瘤细胞中NS蛋白的高表达，使得肿瘤细胞在细胞周期G1/S、G2/M两个重要阶段跃迁，肿瘤细胞一直处在细胞周期的循环当中，促进了细胞的有丝分裂，细胞不断增殖，阻断细胞的进一步分化，研究发现NS蛋白表达率与肿瘤的分化程度呈负相关［5］。可与推测NS基因对细胞的恶性增殖发挥了重要作用，NS的高表达可作为肿瘤恶性程度的一个新指标。有研究［6］显示，在乳腺肿瘤组织中，TNM分期提高，NS基因表达量也提高，而我们的研究发现NS的表达与TNM分期无关，这一点还需要进一步研究。我们发现，NSCLC分化低的组织，NS的表达高，提示NS在肿瘤分化过程中起重要作用，很可能与患者的预后有关，关于患者的预后情况我们正在跟踪调查之中。

［1］刘冉录，徐勇，张志宏，等.核干因子在前列腺癌中的表达及其临床意义.中华男科学杂志，2008，5(14):418-422.

［2］misteli T.Going in GTP cycles in the nucleolus.J Cell Biol，2005，168(2):177-178.

［3］H，Pederson T.Depletion of the nucleolar protein nucleostem in causes G1 cellcycle arrest via the p53 pathway.Mol Biol Cell，2007，18(7):2630-2635.

［4］童秀珍，邹外一，珊珊，等.急性白血病患者骨髓细胞 nucleostemin基因的表达与其类型、疗效的关系.中国病理生理杂志，2008，24(11):2171-2174.

［5］李娟，黎友伦，程序.Nucleostemin基因在非小细胞肺癌组织中的表达及意义.中国组织化学与细胞化学杂志，2010，19(3):229-233.

［6］蔡子微，郑学芝，胡静.乳腺肿瘤组织nucleostemin基因表达与临床病理表现的关系.中国病理生理杂志，2007，23(11):2191-2194.