马明明 王雪晶 方燕南 李玮 张杰文

脑卒中是临床上常见的急性脑血管病，具有高度的致残率和致死率，如何有效地促进脑梗死后神经元及突触的可塑性，是目前亟待解决的关键问题。我们既往的研究发现证明了电刺激可通过增强星形胶质细胞活性而促进瘫痪肢体功能恢复［1-3］，但对肢体和梗死灶周围头皮电针的刺激没有作对照，因此对肢体电刺激和梗死灶周围头皮的电刺激对脑梗死后的神经干细胞的梗死后的修复情况有待于进一步研究。本课题根据以上研究成果，结合临床上电刺激治疗缺血性卒中的不同方法，本课题拟解决梗死灶周围头皮电针刺激和肢体电针刺激对大脑缺血性卒中的恢复程度有无影响和二者之间的差异。

1 资料与方法

1.1 动物模型与分组 本课题选用2～3月龄，体重80～120 g雄性SD大鼠95只。85只大鼠建立双肾双夹法的方法复制RHRSP模型［4］。术前1 d测1次基础血压，RHRSP后1周开始，每周测定1次，待血压升高并趋于稳定后，每2周测1次。RHRSP后12周选择血压＞24 kPa且无脑卒中症状，体重450～500 g 的 RHRSP 75 只，采用 Wahl等［5，6］的方法加以改良制作MCAO模型。

分组如下:①梗死灶周围电刺激组(A组):进行MCAO模型制作24 h后选择梗死灶周围头皮进行电刺激治疗，1次/d。分别在1 d、2 d及1周、2周、3周、4周每个疗程结束后次日处死。每个时间点3只，共18只。②肢体电刺激组(B组):进行MCAO模型制作24 h后选穴病灶对侧相当于人的“曲池”、“外关”、“太冲”及“足三里”，进行上述同样强度和时间的电刺激干预治疗。1 d、2 d、1周、2周、3周、4周每个时间点3只，共18只。③对照组(C组):进行MCAO模型制作，但不进行电刺激治疗。1 d、2 d、1周、2周、3周、4周每个时间点3只，共18只。④假手术组(D组):手术过程同上，但不凝闭大脑中动脉。

1.2 电刺激治疗和神经功能评分 ①A组:选择梗死灶周围头皮进行电刺激治疗，1次/d。频率75次/min，电流1～2 mA，20 min/次。1 d实验组大鼠治疗24 h后，于次日处死待查。1周实验组治疗6次后，于次日处死待查。2周、3周、4周实验组大鼠6 d治疗1个疗程，停1 d进行下个疗程治疗，每个疗程结束后次日处死。②B组:选穴为病灶对侧相当于人的“曲池”、“外关”、“太冲”及“足三里”，上述同样强度和时间的电刺激干预治疗。③C组和D组:不进行电刺激治疗。

各组均于梗死第2天开始神经功能评分(BWT，beamwalking test)［7］，第一周 1 次/d，以后每周两次。

1.3 统计学方法 采用 SPSS 12.0统计软件。正态分布计量资料用均数±标准差表示，偏态分布资料用中位数表示。3组或以上的方差齐性计量资料用单因素方差分析(ANOVA)，两组独立样本用t检验统计方法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RHRSP(肾血管性高血压大鼠)血压改变 85只SD大鼠用于复制RHR，RHRSP术后12周内死亡3只，血压未达到180 mm Hg以上两只，有卒中症状及体征5只。另10只大鼠作假手术组，仅打开腹腔，但不进行双侧肾动脉夹闭术。术后随机抽取10只大鼠与假手术组组进行统计学分析。

应用SDP-1型大鼠心率血压计测量的尾动脉血压为大鼠的收缩压。RHRSP术前血压为(115.21±12.03)mm Hg，MCAO 后2、4、8、12周血压明显高于术前(P ＜0.05)，RHRSP后各时间点的血压明显高于假手术组(P＜0.05)。假手术组大鼠术前血压为(117.45±10.78)mm Hg，RHRSP后血压波动，无明显规律性(P＞0.05)。

2.2 电刺激对神经功能评分的影响 按照Feeney运动功能评分方法［8］。假手术组无运动功能缺损，评分均为7分(正常)。电刺激前A组、B组及C组3组间评分没有显著性差异(P＞0.05)。电刺激后第1周，A组分别与B组、C组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，而B组与C组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。电刺激治疗后第2周，A组与B组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，其两者分别与C组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)，此时3组评分较刺激前差异有统计学意义(P＜0.05)。刺激后第3周到第4周A组与B组评分差异无统计学意义(P＞0.05)，其二者与C组(对照组)相比差异有统计学意义(P＜0.05)。组内比较，刺激后第1周开始，A组、B组、C组和刺激前相比均有显著性差异(P＜0.05)，此种现象一直持续至第4周。

3 讨论

本实验按照双肾双夹方法复制肾血管性高血压模型，血压在肾动脉狭窄RHRSP后1～2周开始上升，10周后血压基本稳定，与既往研究结果一致。说明该模型的方法稳定可靠，能够模拟人类高血压的发展过程，以此作为脑梗死的研究模型更接近临床，具有更大的指导意义。在RHRSP基础上制作大脑中动脉皮层支永久性闭塞模型(MCAO)［4，6］，产生恒定的梗死灶，不同个体间的一致性好，更好显示电刺激对神经功能恢复的影响，RHRSP制备的各种脑缺血-梗死模型，可广泛用于模拟人类高血压动脉硬化性脑卒中的发病机制、发病后病理生理改变、预防和治疗效果验证等多方面研究。

本课题为了观察电刺激对脑缺血后神经干细胞的影响，在MCAO模型制作成功24 h后给予电刺激干预治疗。在不同的时间段内进行神经功能评分，并比较电针刺激肢体与梗死灶周围头皮对神经功能评分的影响，结果发现:第1周开始A组恢复程度比其他两组都好，但B组并不比C组好，与刺激前比较仅A组有进步;第2周A组仍比B组好，但B组较刺激前开始有进步，而C组较刺激前进步仍无意义;第3周到第4周3组均较刺激前均有进步，且A组及B组较C组恢复好，二者间比较，A组和B组之间没有显著性差异(P＞0.05);C组虽然较刺激前有改善，但较A组、B组仍差。

刺激前三者均为MCAO成功大鼠，彼此之间没有显著性差异;随着电刺激的进行，三者之间出现差距，从上可以看出电刺激治疗的效果较快，在电刺激后1周A组的神经功能均较C组有了明显改善，在电刺激第2周两个电刺激组均较C组有了明显改善。这也说明电刺激可以改善神经功能评分，但梗死灶周围头皮电刺激比肢体电刺激对神经功能的改善要早而且快。提示我们在临床上可以采取肢体电刺激和梗死灶周围头皮电刺激结合的方法对脑卒中进行康复。从上述结果对电刺激刺激对神经功能的改善不同时段的观察可以看出，三个实验组有一个共同的现象就是从MCAO后的第2周开始神经功能有了明显改善，这种改善持续到第四周。这说明，脑缺血运动功能康复的关键时期是两周之内，在梗死后7 d之内梗死灶周围头皮电刺激已开始促进神经功能的恢复，而且较肢体电刺激早而明显。提示我们，脑梗死后尽早干预治疗的重要性。

考虑电刺激治疗促进急性脑梗死后运动功能康复的可能机制为:反复的电刺激可能通过机械刺激，通过感觉传导通路或非特异性感觉传导通路或网状结构，到达对侧半球的脑梗死边缘区功能尚存的星形细胞或神经元，激发他们的活性，重建与周围神经元的信息联络网，使脑内侧支循环开放、脑组织细胞供血、供氧能力增强，虽不能使坏死的神经元“死而复生”，但却可以消除梗死边缘区的水肿，挽救濒临失去功能的神经元，促使星形胶质细胞增殖，加强修复功能;另一方面使瘫痪肢体功能重建［1-3，9-11］。这提示电刺激可能通过该“重建的通路”以促进星形胶质细胞的缺血性水肿的消退，从而更好地发挥其功能，促进神经元信息联络网的重建，进行功能代偿。这可能与星形细胞能引起脑微血管舒张的假说有关［12，13］。但这种微血管的扩张究竟是否与星形细胞有关，有待今后进一步提出更多的实验证据来证实。

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