陈 军 舒 翔 余南才

（湖北省武汉市第一医院，武汉430022）

中药金银花质量控制研究

陈 军 舒 翔 余南才

（湖北省武汉市第一医院，武汉430022）

目的 建立以绿原酸为标准进行金银花的质量控制方法。方法 薄层色谱鉴定金银花中绿原酸，HPLC测定金银花中绿原酸含量。结果 金银花药材供试品和绿原酸对照品在硅胶H板上展开后Rf值相等，显示相同的荧光斑点。HPLC测定三产地的金银花中绿原酸含量分别是4.35%、4.32%、4.29%。结论 HPLC方法测定金银花中绿原酸含量方法简单快捷，重复性好。

绿原酸；金银花；质量

金银花（Flos Lonicerae）又名银花、双花，是忍冬科植物忍冬、山银花、红腺忍冬的干燥花蕾或初开的花。性寒，味甘，归脾、胃、心经，有疏散风热、清热解表、解毒的作用，主治外感风热、咳嗽、发热等症[1]。李时珍的《本草纲目》中清晰记载：“金银花对一切肿毒，败毒托里，散气活血，其功能独胜”[2]。金银花中的主要活性成分是绿原酸，因此有必要对金银花药材中含量很高的绿原酸进行鉴别和质量控制。

1 仪器与试药

绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号20101108）；硅胶H薄层板（青岛海洋化工厂）；AB104-N电子天平（托力多有限公司）；高效液相色谱仪（美国Waters公司）；LC-295紫外检测器；MTPERS BDS C18色谱柱；金银花的花蕾（山东青岛、河南密县、重庆南川县三产地的种植基地）；乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 硅胶薄层鉴定

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸标准对照品5.0mg，用甲醇超声溶解，完全溶解后用甲醇定容于5ml的容量瓶中，即得1mg/ml的绿原酸对照品溶液，放置于4℃冰箱。

2.1.2 样品溶液的制备 精密称取金银花干燥药材1g，放置于50ml的圆底烧瓶中，加入蒸馏水25ml煎煮20min。过滤，精密量取滤液10ml于30ml的容量瓶中，加入乙酸乙酯定容，振摇，蒸干，将残渣加甲醇1ml使其完全溶解，即得样品溶液。

2.1.3 薄层鉴定结果 按照2010年中国药典附录VIB薄层鉴定的操作进行，吸取对照品溶液和样品溶液各2ul，点于硅胶薄层板上，用乙酸乙酯-甲酸-水（7:3:3）展开剂展开，取出，在紫外灯365nm下检测。结果绿原酸对照品和样品溶液展开后斑点位置在同一水平线上，Rf值相等，在紫外线下均显示蓝色荧光斑点。

2.2 HPLC测定绿原酸含量

2.2.1 色谱条件考察 Hypersil ODS色谱柱（250mm× 4.6mm，5um），流动相：乙腈:0.2%醋酸水=3:7，洗脱流速0.8ml/min，检测波长327nm，柱温30℃。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品5mg，置于10ml容量瓶中，用50%甲醇超声溶解，完全溶解后用50%甲醇定容，即得0.5ml/ml的绿原酸标准品溶液。将该配制的母液稀释成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml一系列标准溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 准备量取金银花中提取纯化后的浓缩液1ml，置于10ml容量瓶中，加50%的甲醇超声溶解，定容，备用。

2.2.4 线性关系考察 将以上配制的一系列对照品标准品溶液10μL分别注入高效液相中，按照上述的色谱条件进行操作，测定峰面积，得出线性回归方程Y=516350X＋183433，r=0.9958，n=5，表明在0.5～2.5μg/ml范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 精密量取绿原酸标准对照品的母液10μL，进行高效液相色谱，进样5次，测的精密度RSD=0.84%。

2.2.6 稳定性试验 精密吸取6份上述配制的供试品溶液10μL，分别放置0、1、2、4、8、12小时后进高效液相，测定结果发现供试品溶液在12h内稳定性良好，RSD=0.58%。

2.2.7 加样回收率试验 精密量取已知绿原酸含量的供试品溶液3份，分别加入对照品溶液适量，在同一水平条件下测定3次，测得平均回收率99.48%，RSD=1.24%。

2.2.8 样品测定 取出不同批号的三产地金银花样品溶液，按照含量测定的方法及色谱条件进行测定，按照外标法计算样品中绿原酸含量。结果见表1。

表1 三产地的金银花中绿原酸含量测定结果 （%）

3 讨论

中药卫生部颁发标准对金银花药材的鉴别用薄层色谱是硅胶H板，展开剂是苯:甲酸乙酯:甲酸（3:1.5:0.1），本研究采用该展开剂发现绿原酸对照品样品未展开。改用乙酸乙酯:甲酸:水（7:3:3）展开剂展开，展开效果较好，对照品斑点和样品斑点的Rf=0.58。2010年版《中国药典》规定，金银花中绿原酸的含量不能低于1.5%[3]。本研究中三产地收集的金银花样本中，绿原酸含量最高的是山东青岛产地的，绿原酸含量是4.35%，最低的是重庆南川4.29%，均符合药典规定。HPLC方法具有分离效能高，分析速度快，已经被广泛应用于于化学研究领域。本研究中建立HPLC方法测定金银花中绿原酸含量方法简单、快捷、可靠。

[1] 王天志,李永梅.金银花的研究进展[J].华西药学杂志,2000,15(4):292-298.

[2] 赵国玲,刘佳佳,林丹.金银花化学成分及药理研究进展[J].中成药,2002, 24(12):973-976.

[3] 王力川.金银花的化学成分及功效研究进展[J].安徽农业科学,2009,37(5): 20 36-2037.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.15.105

1672-2779（2012）-15-0160-02

苏玲

2012-05-15）