孔德宪，姜海，刘育强，张特利，段文静，卢树杰，*

（1.神威药业有限公司，河北 石家庄 051430；2.河北省中药注射剂工程技术研究中心，河北 石家庄 051430）

质量

HPLC测定连参通淋片中盐酸小檗碱的含量

孔德宪1，姜海1，刘育强1，张特利1，段文静2，卢树杰1，2*

（1.神威药业有限公司，河北 石家庄 051430；2.河北省中药注射剂工程技术研究中心，河北 石家庄 051430）

目的：建立连参通淋片中盐酸小檗碱含量的测定方法。方法：高效液相色谱法，C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），乙腈－水（1∶1）（每1 000mL中加磷酸二氢钾3.4 g，十二烷基硫酸钠1.7 g）为流动相，检测波长345 nm。结果：盐酸小檗碱在0.127 4～0.637 0μg呈良好线性关系，平均回收率为98.62%，RSD＝1.17%。结论：该方法简便、灵敏、准确，适用于连参通淋片中盐酸小檗碱的含量测定。

高效液相色谱法；连参通淋片；盐酸小檗碱

连参通淋片为神威药业有限公司自主研发的中药6类新药，由黄连、苦参等十余味药味组成，具有清热解毒，燥湿杀虫，利尿通淋，健脾化浊的功能，用于临床诊断为非淋菌性尿道炎，辩证属湿热下注者，临床表现尿频、尿急、尿痛，排尿困难，尿道刺痒，尿道口有分泌物。其中黄连为君药，其所含生物碱为本制剂活性成分，研究采用高效液相色谱法测定制剂中盐酸小檗碱的含量，从而控制产品质量。

1 仪器及试药

高效液相色谱仪：日本岛津LC-6A；色谱柱：C18（4.6 mm×250 mm，5μm）。乙腈：色谱纯；磷酸二氢钾：分析纯；十二烷基硫酸钠：化学纯。连参通淋片（神威药业有限公司，批号：090421，090422，090423）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－水（1∶1）（每1 000 mL中加磷酸二氢钾3.4 g，十二烷基硫酸钠1.7 g）；检测波长345 nm，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品6 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含盐酸小檗碱30μg）。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，精密称取0.5 g，加乙醇60 mL加热回流2 h，放冷，转移至100 mL量瓶中，加乙醇适量洗涤容器，洗液与残渣并入量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，置以处理好的中性氧化铝柱（100～200目，3 g，内径10 mm）上，加乙醇洗脱，收集洗脱液至50 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 专属性试验

按处方比例及工艺，制备缺少黄连的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含盐酸小檗碱的阴性对照溶液。盐酸小檗碱与样品中其他成分峰分离度R＞1.5，阴性对照无干扰，见图1。

2.5 线性关系考察

精密吸取对照品溶液（63.7μg·mL－1）2，4，6，8，10μL，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以盐酸小檗碱的量为横坐标，峰面积的积分值为纵坐标，作图得标准曲线，其回归方程为Y＝1 566 085X－4 273（r＝0.999 9），线性范围0.127 4～0.637 0μg。

2.6 精密度试验

精密吸取供试品溶液，重复进样6次，记录色谱图，求得RSD＝0.64%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

图1 盐酸小檗碱HPLC图

取供试品溶液，分别于配制后0，1，3，5，21，23，25 h依法测定，计算RSD＝1.30%，结果表明供试品溶液在25 h内基本稳定。

2.8 回收率试验

采用加样回收试验，精密称取己知含量的连参通淋片（批号：090421），细粉0.25 g共6份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（0.376 mg·mL－1）10 mL，依法测定。计算回收率，结果见表1。

2.9 含量测定

取090421，090422，090423 3批连参通淋片，按供试品制备方法制备，精密吸取对照品溶液及供试品溶液，依法测定，计算盐酸小檗碱含量，结果分别为18.3，19.1，19.2 mg/片。

表1 盐酸小檗碱加样回收率试验

3 讨论

3.1 流动相的选择

盐酸小檗碱的含量测定方法报道较多，但能将几种生物碱全部分离且峰形良好者不多，该研究参考相关文献［1，2］和日本药局方［3］收载的流动相条件，并进一步试验摸索和验证，最后选择的流动相能达到较好的分离效果。

3.2 样品的处理

取样品适量，分别采用超声法，回流法及索氏提取法进行提取，按上述色谱条件测定。超声法提取不完全；索氏提取法时间过长，需十几个小时；加热回流法提取效率较高，经试验确定回流2 h为宜。将回流提取的供试液通过一中性氧化铝柱［4］，可除去干扰杂质，利于含量测定。该方法简便、灵敏、准确，适用于连参通淋片中盐酸小檗碱的含量测定。

［1］韩凤梅，李宇，柳伟，等.反相离子对色谱法测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量［J］.分析化学，2005，33（11）：1667.

［2］樊晓霞，万里燕，袁丽萍，等.高效液相色谱法测定复方苦参洗剂中盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量［J］.中国药学杂志，2005，40（23）：1820-1821.

［3］日本厚生省.日本药局方［S］.第十二改正.日本：厚生劳动省，1998：981-982.

［4］王宝琹.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：146-163.

Content Determ ination of Berberine Hydrochloride in Lianshentonglin Tablets by HPLC

KONG De-xian1，JIANG Hai1，LIU Yu-qiang1，ZHANG Te-li1，DUANWu-jing2，LU Shu-jie1，2
（1.Shineway Pharmaceutical Co.Ltd．，Shijiazhuang 051430，China；2.Hebei Province Engineering Research Center for Traditional Chinese drug Injections，Shijiazhuang 051430，China）

〛 Objective：To determine the content of Berberine hydrochloride in Lianshentonglin Tablets.

Methods：HPLCmethod was used.Using C18（4.6 mm×250 mm，5μm）as analytical column.The mobile phase was acetonitrile-water（1∶1）［contain potassium dihydrogen phosphate 3.4 g and sodium dodecyl sulfate 1.7 g·（1 000mL）－1］.Detection wavelength is 345 nm.Results：A good linear range was shown at the concentration from 0.127 4μg to 0.637 0μg.The average recovery was98.62%and the RSD was1.17%.Conclusion：Themethod is simple，sensitive，accurate，and can be used for the quality control of Lianshentonglin Tablets.

HPLC；Lianshentonglin Tablets；Berberine hydrochloride

*卢树杰，Tel：（0311）88030066-2320，E-mail：sun＠shineway.com

2010-12-13）