林 静,朱秀梅,李 楠,张金库

(1.承德医学院,河北承德 067000;2.吉林大学南湖校区医院,吉林长春 130012;3.保定市第一中心医院,河北保定 071000）

根据基因表达分析,给几种癌定义出了新的亚型,其中乳腺癌从基因角度鉴定出五个亚型:管腔A型(luminal subtype A）,管腔B型(luminal subtype B）,HER-2过表达型(HER-2 over-expression subtype）,正常乳腺样型(normal breast-like subtype）和基底细胞样型(basal-like subtype）。其中,基底细胞样乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC）约占全部乳腺癌的8%-20%,且临床预后较差[1]。基底细胞样乳腺癌表达高分子量细胞角蛋白(如CK5/6）和/或EGFR等,而不表达ER、PR、HER-2[2]。目前,针对BLBC 这个特定亚型的抗癌治疗尚未建立起来,因此,探寻其有效的分子治疗靶点成为BLBC的研究热点。本实验通过免疫组化方法检测 CD109、CD117、Vimentin在BLBC中的表达情况,以增加对该类乳腺癌亚型的认识。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集保定市第一中心医院病理科2006年1月～2011年3月手术治疗及会诊的乳腺浸润性导管癌患者的存档蜡块325例。标本均常规取材,中性甲醛固定,常规石蜡包埋,4μ m厚连续切片。根据被大多数学者所认同的BLBC判断标准(ER、PR、HER-2呈三联阴性,同时表达一种或一种以上的基底细胞型角蛋白和/或P63和/或EGFR）筛选出BLBC病例51例,同时从余下的274例非BLBC病例中随机选出50例作为对照组。全部标本均经病理证实,所有病例术前均未进行放疗、化疗及内分泌治疗。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化 免疫组织化学采用EnVision二步法,抗体选用 CD109、CD117、Vimentin、ER、PR、HER-2、CK5/6、P63、EGFR。以上抗体与试剂除 CD109 购自武汉华瑞康生物科技有限公司,其余均购自福州迈新生物技术开发有限公司。阴性对照:以PBS替代第一抗体的乳腺浸润性导管癌组织免疫组化染色结果为阴性对照。阳性对照:以预试验中己证明阳性的乳腺癌组织切片免疫组化染色结果为阳性对照。

1.2.2 免疫组化染色结果的判定和分析 采用双盲法观察阳性反应,阅片由两位高年资病理科医师独立观察每张切片后分别做出判断。ER、PR、p63阳性表达显示棕黄色均匀细颗粒位于细胞核,CD109、CD117、HER-2阳性表达显示棕黄色均匀细颗粒位于细胞膜,CK5/6阳性表达显示棕黄色均匀细颗粒位于细胞浆,EGFR阳性表达显示棕黄色均匀细颗粒位于细胞膜和细胞浆。判断标准:根据阳性细胞占同类病变细胞数的比例和着色程度分为4级:(-）为肿瘤组织无细胞膜/浆/核染色或≤10%细胞膜/浆/核染色;(+）为＞10%肿瘤组织细胞膜/浆/核部分染色;(++）为＞10%肿瘤组织细胞膜/浆/核弱～中度完全染色;(+++）为＞10%肿瘤组织细胞膜/浆/核高度完全染色。其中HER-2蛋白(-）或(+）定性为阴性;(++）定性为可疑阳性;(+++）定性为阳性(参照《中华病理学杂志》2003年10月第32卷第5期《乳腺癌HER-2/neu的免疫组织化学检测》中的HER-2阳性判断标准）。CD109、CD117、ER、PR、p63、CK5/6、EGFR(-）定性为阴性,(+）～(+++）定性为阳性。

图1 免疫组织化学染色 CD109阳性(×200）

1.3 统计分析

数据结果采用统计软件SPSS16.0进行统计分析,组间率比较采用 χ2检验进行分析,以 α=0.05作为检验水准,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

免疫组化染色CD109蛋白主要表达于BLBC肿瘤组织的细胞膜上,非BLBC肿瘤组织不着色。BLBC组和非 BLBC组中CD109、CD117、Vimentin阳性表达率详见表1。结果采用 χ2检验进行组间阳性率的比较,其中CD109的组间率比较差异有统计学意义(P＜0.05）。CD117、Vimentin的比较差异没有统计学意义(P＞0.05）。CD109阳性组与CD109阴性组在组织形态学上的比较,不具有统计学意义。上述结果提示,CD109在BLBC中的表达具有特异性,可以作为一个判断BLBC的免疫标记;CD117、Vimentin在BLBC中的表达不具有特异性,尚不适宜做BLBC的判断标记。

表1 CD109,CD117,Vimentin在 BLBC与非BLBC中的表达情况

3 讨论

CD109蛋白是新近克隆到的一种细胞表面抗原,属于含硫酯的α 2巨球蛋白/C3、C4、C5家族成员之一[4]。研究显示,CD109表达于胎儿和成人CD34阳性的造血干和祖细胞,内皮细胞,活化的T淋巴细胞和活化的血小板;另外,CD109可表达于肺、食管及子宫的鳞状细胞癌[6-8]。最新的研究发现,CD109还可表达于乳腺、涎腺、泪腺的肌上皮细胞及前列腺基底细胞和肌上皮组分的良性肿瘤[9]。目前,尽管CD109的生理功能尚不十分清楚,但在人类角化细胞中CD109能够通过与TGF-β(transforming growth factor β）受体结合而抑制 TGF-β信号[10]。这些研究结果表明,可将CD109作为一种新的乳腺上皮细胞标记[11],另外,由于CD109是一种细胞表面蛋白,它很可能成为乳腺癌治疗的一个潜在分子靶点。本研究中,CD109在BLBC中的阳性表达率为60.78(31/51）,而在非 BLBC中均呈阴性,提示CD109可以作为一个判断 BLBC的免疫标记。另外,在CK5/6和或P63和或EGFR阴性的病例中有CD109阳性表达,提示检测CD109可以协同CK5/6、P63、EGFR提高BLBC的检出率。

CDl17是由c-kit原癌基因编码的一种跨膜酪氨酸激酶受体,最初被用于胃肠道间质瘤的检测,现在已经发现它在多种细胞中均有表达,正常乳腺组织的上皮细胞可以表达,BLBC的肿瘤细胞也可以表达,相对于其它乳腺癌它在BLBC中的表达更常见,在mRNA检测时,CD117是乳腺癌基底细胞样表型最好的指标之一,但在免疫组化时其表达率较低[11]。本研究的BLBC组中CD117的免疫组化阳性表达率为11.76%(6/51）,没有发现其表达与BLBC之间存在密切关系,这可能与我们所选的检测方法及样本量不足够大有关。

Vimentin是最普遍的中间丝蛋白,在所有干细胞中表达,但分化过程中它可转化成其他中间丝[12]。它参与细胞骨架的构成,与细胞的膜系统广泛连接。有研究表明可溶性Vimentin多肽还具有与细胞的核酸和组蛋白结合的能力,具有调控细胞生长、分裂的作用[13]。有文献报道,Vimentin的阳性表达具有提示乳腺癌预后的意义与淋巴结的状态相关:Vimentin提示预后不良的情况仅存在于淋巴结转移阴性的乳癌,不包括淋巴结转移者[14]。有报道表明BLBC易发生内脏特别是脑和肺转移与Vimentin的高表达有关。我们的实验发现,Vimentin在BLBC中表达增高,但和其在非BLBC中的表达无显著差异,与淋巴结转移无相关性,因此,本研究显示Vimentin尚不能作为鉴别BLBC的特异性标记物。

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