陶大利

（黑龙江省农垦乳品检测中心，黑龙江省哈尔滨 150078 ）

叶黄素（Lutein）（3,3-二羟基-α-胡萝卜素）是一种萜，分子式：C40H56O2,分子量：568.85。［1］它是一种广泛存在于蔬菜、花卉、水果与某些藻类生物中的天然类胡萝卜素，其色泽鲜艳，着色力强，抗氧化性好，安全无毒害，具有丰富的营养价值，被广泛的应用于食品、保健品、化妆品、医药、烟草和动禽类饲料的多个领域。［2］近些年的研究表明，叶黄素是帮助眼睛发育的关键营养元素，它具有过滤蓝光和抗氧化的作用，是婴幼儿的“隐形太阳镜”。所以叶黄素被广泛的添加到婴幼儿配方奶粉中。本文以GB/T23209-2008（奶粉中叶黄素的测定 液相色谱-紫外检测器）为基础，对方法进行了改进，提高了对奶粉中叶黄素的提取效率。

1 实验部分

1.1 试剂

甲醇：色谱纯；甲基叔丁基醚：色谱纯；丙酮：优级纯；2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）：纯度大于99%；叶黄素标准品；

1.2 仪器与材料

PE高效液相色谱仪（带钨灯）；分析天平：感量0. 1mg；漩涡振荡器；高速离心机；

1.3 方法

1.3.1 处理步骤

准确称取奶粉样品0.5-1g（精确到0.1mg）到30mL的塑料离心管中，加入5mL 40℃水充分溶剂，用铝箔纸包裹离心管外部（避光），加入10mL含0.1%2,6-二叔丁基甲酚（BHT）的丙酮溶液，分数次涡旋震荡5min,使水溶液和丙酮溶液能充分混合，再超声10min,向离心管中加入4g氯化钠，分数次涡旋震荡5min，以4000转/min，离心5min,上清液过0.45μ m有机滤膜过滤，上机。样品含量低时可吸取上清液5mL 30℃氮气吹干浓缩至近干，再用含0.1%2,6-二叔丁基甲酚（BHT）的丙酮溶液定容至1mL。

1.3.2 仪器条件

a)色谱柱：C30色谱柱4.6×250,5μm；

b)柱温：30℃；

c)流速：1.0mL/min；

d)波长：445nm；

e)进样量：40μL；

f）流动相：A(甲醇)，B（甲基叔丁基醚）梯度洗脱见表1

1.3.3 测定条件

用叶黄素标准工作液分别进样，叶黄素的参考保留时间为5.47min，以标准系列工作液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线计算未知样品的浓度，进行结果计算，用以上条件得到的叶黄素色谱图入下图：图1为叶黄素标准品图谱，图2为婴儿配方奶粉谱图

1.3.4 计算公式

式中 X：样品中叶黄素的含量，μg/100g；

C:由标准曲线中查得的试样中叶黄素的浓度，μg/mL

V:试样稀释体积，mL；

m:试样的质量，g；

2 结果

2.1 标准曲线

在选定的色谱条件下，将叶黄素标准溶液配制成浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、1.0、2.0μg/mL 6个浓度系列，在此浓度范围内，浓度与对应的峰面积呈线性关系，线性方程为：y=379874.03X+14289.56,相关系数R2=0.9990如图3

2.2 精密度与重现性

选用含有叶黄素的婴儿配方奶粉（育儿康幼儿配方奶粉）进行6平行试验。结果如表2

2.3 回收率

选用同上的样品（育儿康幼儿配方奶粉）分别称取1g样品，两个做空白，分别在样品中加入0.5μg、 1μg、2μg、5μg三个梯度，每个梯度做4平行（n=4）结果如表3

由表2得出，加标量在0.5～5μg，折算成奶粉的含量为50～500μg/100g时，回收率在92.8～103.5之间，RSD%在1.2～3.5之间

2.4 检出限

当称样量为1g，样品经浓缩5倍，进样量为40μL时，以3倍信噪比S/N计算，该方法的检出限为5μg/100g。

3 讨论

由于奶粉样品呈细小的颗粒状，如果按照标准GB/T 23209-2008中的处理方法，虽然也可以获得较高的回收率，但不能将样品包裹的叶黄素完全释放出来，造成样品的测试结果偏低很多，并且因为叶黄素在奶粉样品中包埋的程度不一致，使测试结果的重现性很差。解决这一问题可以先用温水将样品充分溶解，再用丙酮溶液提取，再用氯化钠去饱和水溶液［3］，离心使水相与丙酮溶液彻底分开。另外叶黄素遇到光照很容易损失，所以在整个处理过程中都应尽量避光，可以在离心管外部裹上铝箔纸来避免光照。

本方法处理简单，易操作，回收率和重现性好，适合婴儿配方奶粉中叶黄素的测定。

[1]梅益，中国百科全书（化学卷）Ⅱ［M］.北京：中国百科全书出版社，1989.1098-1099

[2]孙晓霞刘云凤，章鹏飞，叶黄素在食品中的应用.中国食品添加剂，1006-2513（2007）4-0127-05

[3]GB/T 5009.20-2003 食品中有机磷农药残留的测量，6.2净化