符方淑，林方德，邢小丽

(文昌市人民医院药剂科1普外科2，海南 文昌 571300)

研究显示，干扰素α2b对人体免疫系统调节具有比较重要的作用。干扰素α2b可增强机体的细胞免疫功能，促使NK细胞活性增强，使白细胞介素2(IL-2)表达增强[1-2]。但尚未见有关干扰素α2b对肝癌术后患者Th1/Th2漂移影响的研究报告。本研究以IL-2代表Th1类细胞因子，白细胞介素4(IL-4)代表Th2类细胞因子，通过酶标记免疫吸附测定法(ELISA)方法技术检测原发性肝癌术后短期应用重组人干扰素α2b后外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达，探讨重组人干扰素α2b在肝癌切除后对患者机体Th1/Th2平衡状态的变化，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年1月至2010年12月在我院住院的原发性肝癌患者48例，均为手术后病理确诊患者，应用重组人干扰素α2b 25例为研究组，男性19例，女性6例；年龄42～69岁，平均(51.4±9.8)岁；其中包括胆管细胞性肝癌6例，肝细胞性肝癌15例，混合细胞性肝癌4例；肿瘤平均直径(5.4±1.9)cm；血清甲胎蛋白(AFP)＞400 ng/ml 8例，AFP 20～400 ng/ml 10例，AFP＜200 ng/ml 7例。单纯手术切除23例为对照组，男16例，女7例；年龄39～61岁，平均(49.8±9.7)岁；肝细胞性肝癌18例，胆管细胞性肝癌2例，混合细胞性肝癌3例；肿瘤直径(5.2±1.6)cm；AFP ＞400 ng/ml 8例，AFP 200～400 ng/ml 10例。AFP＜ 200 ng/ml 5例。

1.2 方法 研究组：常规治疗基础上加重组人干扰素α2b 100万U肌注，每天1次，10 d为一个疗程，连续治疗两个疗程，对照组行常规治疗。所有患者均于术前和术后10 d采集肘静脉血4 ml，EDTA-K2抗凝。采用ELISA方法检测IL-2、IL-4[3-4]。从已平衡至室温的密封包装袋中取出所需板条，除空白孔外，分别将标本或不同浓度标准品(100 μl/孔)后用封板胶纸封住反应孔，放到37℃孵箱孵育90 min，洗板4次。除空白孔外，加入生物素化抗体工作液(IL-2或IL-4)(100 μl/孔)。还是用封板胶纸封住反应孔，再放入37℃孵箱持续孵育60 min，洗板4次。除空白孔外，加入酶结合工作液(100 μl/孔)。随即用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30 min，洗板4次。加入显色剂5(100 μl/孔)，避光37℃孵箱持续孵育15 min。最后加入终止液6(100 μl/孔)，混匀后即刻测量OD450值。

1.3 统计学处理 采用统计学软件SPSS17.0，计量资料均以均值±标准差(±s)表示，各组数据进行方差齐性检验。组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究组术前Th1类细胞因子IL-2、Th2类细胞因子IL-4与对照组表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)；术后20 d，研究组Th1类细胞因子IL-2显著增高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。研究组Th2类细胞因子IL-4略增高，与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，代表Th平衡的Th1/Th2(IL-2/IL-4)比值，研究组与对照组比较明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1、表2。

表1 两组患者术前、术后Th1/Th2的变化(±s)

表1 两组患者术前、术后Th1/Th2的变化(±s)

注：与对照组比较，aP＜0.05，同组与治疗前比较bP＜0.05。

组别 例数对照组研究组23 25治疗后264.34±24.32 254.53±24.43 IL-2（pg/ml）治疗前47.32±12.48 45.24±11.21治疗后57.53±11.32 142.34±13.32ab IL-4（pg/ml）治疗前253.32±22.53 246.76±24.34

表2 两组患者Th1/Th2治疗前后平衡的变化（%）

3 讨 论

研究表明，与其他恶性肿瘤患者一样，原发性肝癌患者也存在着明显的细胞免疫功能低下的现象，干扰素α2b通过提高细胞免疫功能治疗肿瘤，干扰素α 2b对肿瘤细胞进行识别和抑制，促使T淋巴细胞分化、分裂、成熟、繁殖、调整辅助性与抑制性T细胞的比例，分泌某些细胞因子[5]，但其提高免疫功能的机制尚需进一步研究阐明。

辅助性T细胞(Helper T cell)简称Th细胞。其中，Th1细胞参与细胞免疫和迟发性超敏性炎症反应；Th1细胞主要分泌白细胞介素-2、肿瘤坏死因子等，主要介导局部炎症和细胞毒性有关的免疫应答，辅助抗体生成，参与迟发型超敏性炎症及细胞免疫应答的发生，故称为炎症性T细胞[6]。Th2细胞可辅助B细胞分化，主要功能为刺激B细胞增殖并产生免疫球蛋白G和免疫球蛋白E抗体，参与体液免疫应答[7-8]。在机体内微环境中，大部分细胞因子都可以上调Th2类因子，其中腹腔液局部的淋巴细胞和血液中的单核细胞产生的IL-4是介导Th2细胞发育和抑制Th1型细胞因子应答的主要细胞因子[9-10]。因此，我们把IL-2作为Th1类因子、IL-4作为Th2类因子的表达水平为检测患者免疫状态的指标。T细胞亚群的变化可以反映出细胞表型的变化，可以通过辅助性T细胞Th1/Th2亚群的平衡比率来体现[11]。所以研究人员对患者在机体免疫反应发生时或者出现疾病时Th1/Th2的状态进行了大量的研究。正常机体状态下的细胞因子Th1/Th2处于一种动态平衡中，当Th1/Th2平衡失调并出现Th1或Th2转化时，称为Th1/Th2的偏移[12]。研究表明病理状态下，如手术、外伤、肿等，患者一般是向Th2偏移，Th2细胞因子在患者体内处于优势状态，对于抗肿瘤免疫和创伤恢复是非常不利的。

本研究显示，研究组术前Th1类细胞因子IL-2、Th2类细胞因子IL-4与对照组Th1类细胞因子IL-2、Th2类细胞因子IL-4表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)；说明在手术前，两组患者指标相似，具有可比性。而经过两个疗程的干扰素α2b治疗后，研究组Th1类细胞因子IL-2显著增高，与对照组Th1类细胞因子IL-2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。研究组Th2类细胞因子IL-4略增高，与对照组Th2类细胞因子IL-4比较差异无统计学意义(P＞0.05)，代表Th平衡的Th1/Th2(IL-2/IL-4)比值，研究组与对照组比较明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。说明通过干扰素α2b的治疗后，患者Th1增高，从而导致Th1/Th2的比值上升，说明整个机体Th1/Th2的平衡状态是转向Th1，提高机体的免疫力，保证机体能够处于一种良好的抗肿瘤状态。

总之，肝癌患者肿瘤切除后，通过干扰素α2b的短期治疗，干扰素α2b可以促使Th1类细胞因子表达，使Th1/Th2偏向Th1状态，有利于肿瘤的治疗，也是其提高患者免疫力的作用机理之一，为今后肝癌手术后患者的免疫治疗提供了一个新的思路。

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