抗纤胶囊质量标准的研究

2011-06-06翟美华

中国医药科学 2011年22期

朱琳翟美华

江苏省南通市药品检验所，江苏南通226006

抗纤胶囊是江苏省南通市第三人民医院的医院制剂，功能为扶本固正、活血化瘀、解毒通络，阻止肝纤维化的发生，用于预防和治疗早期肝硬化，临床疗效显著。方中含有汉防己、黄芪、山楂、赤芍、桃仁、苦参及虫草菌丝。该药的质量标准目前比较简略，只包含性状和检查两项，现对其鉴别及含量测定作进一步的研究。

1 药品和仪器

1.1 试剂及样品

粉防己碱对照品（批号110711-200406）、芍药苷对照品（批号110736-200934）、苦参碱对照品（批号110805-200508）购于中国药品生物制品检定所；硅胶G（青岛海洋化工厂）；甲醇、三乙胺为色谱纯；液相用水为去离子水；其余试剂均为分析纯。抗纤胶囊样品及相应阴性对照样品均由江苏省南通市第三人民医院提供。

1.2 仪器

日立L-2000型高效液相色谱仪（日本日立公司）；赛多利斯BP211D电子分析天平。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 赤芍的鉴别取本品内容物1 g，加乙醇10 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺赤芍的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB][1]试验，吸取上述3种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开、取出、晾干，喷5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。阴性对照无干扰。

2.1.2 苦参的鉴别取本品内容物1 g，加浓氨试液0.5 mL，三氯甲烷25 mL，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺苦参的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述两种溶液各4μL，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂，展距8 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（2∶4∶2∶1）10℃以下放置的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰[2]。

2.2 含量测定

2.2.1 溶液的制备 ①精密称取于五氧化二磷减压干燥12 h的粉防己碱对照品15.47 mg，置50 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 mL置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含粉防己碱92.82 μg）。②取

本品内容物1 g，精密称定，加甲醇约100 mL，索氏提取5 h至基本提取完全，转移到蒸发皿中蒸干，用甲醇少量多次洗涤，定容至50 mL容量瓶中，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。③取缺汉防己的阴性样品，同“2.2.1.2”项下方法操作，即得。

2.2.2 色谱条件和系统适用性试验色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-三乙胺溶液（3.5→500）（80∶20），流速：0.9 mL·min；检测波长：283 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

图1 粉防己碱含量测定系统适用性结果

2.2.3 空白试验取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别进样测定。可见供试品色谱中具有与粉防己碱对照品保留时间一致的色谱峰，而阴性对照则没有，说明测定的专属性好，无干扰。见图1。

2.2.4 线性关系考察精密吸取“2.2.1.1”项下对照品溶液1、2、4、6、8、10、12、16、20、30 μL 进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行回归，得标准曲线方程：Y=735786X-428.14，r=1.0000（n=10），表明粉防己碱在0.09282～2.7846 μg范围内呈良好线性关系。

2.2.5 精密度试验精密吸取“2.2.1.1”项下对照品溶液连续进样6次，每次10μL，峰面积平均值为2281537，RSD为0.19%，结果显示，仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验精密吸取供试品溶液，于 1、2、3、4、6、8、10、12 h进样测定，结果RSD=1.56%，试验结果显示，供试品溶液在避光条件下，12 h内稳定。

表1 加样回收率测定结果

2.2.7 重复性试验按“2.2.1.2”项下方法处理同一批样品5份，HPLC分析，计算粉防己碱含量，结果RSD=1.52%，表明方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验取同一批样品0.5 g，精密称定9份，精密量取对照品浓溶液5 mL、6 mL、7 mL各3份，置上述样品中，照“2.2.1.2”法测定，计算粉防己碱含量，求出加样回收率。见表1。

2.2.9 样品的测定分别取3批抗纤胶囊，按上述含量测定方法进行测定，结果粉防己碱含量分别为1.31 mg/粒、1.24 mg/粒、1.27 mg/粒。故暂定本品每粒含粉防己碱（C38H42N2O6）应不低于1.0 mg。

3 讨论

3.1 提取精制方法的选择

本实验比较了加甲醇超声提取、加甲醇索氏提取以及加氯仿和氨水索氏提取3种方法后发现，用甲醇索氏提取，结果粉防己碱的吸收峰相对较大，图形理想。

3.2 流动相的选择

有研究发现如果流动相中没有三乙胺，可见峰形的拖尾较严重，其原因可能是粉防己碱中的碱性氮原子易与C18色谱柱上未完全封尾的氢氧根产生的氢键结合，使其难以洗脱，造成拖尾。加入三乙胺后可取代粉防己碱与色谱柱中的氢氧根产生的氢键结合，减少粉防己碱在色谱柱上的吸附，使其易于洗脱，从而改善色谱峰的形状.在实验流动相筛选过程中若用二乙胺，其分离效果较三乙胺差[3]。在本实验中甲醇-三乙胺溶液（3.5→500）（80∶20），流动相分离效果最好。