李 斌，李俊卿

(1.滨州市食品药品监督管理局滨城区分局，山东 滨州 256618;2.东营市药品检验所，山东 东营 257091)

马来酸甲基麦角新碱注射液为子宫收缩药，临床用于肌注或静脉滴注，因此控制其细菌内毒素含量对于药品的安全性非常关键。为了更好地控制药品质量，笔者参照《中国药典》2010年版(二部)中“细菌内毒素检查法”，通过研究，我们建立了本品细菌内毒素检查法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 ZH－2 BLENDER混匀器;TAL－40型恒温器(天津药典仪器厂);无热原吸头，微量移液器。

1.2 试药 细菌内毒素工作标准品(福州新北生化工业有限公司，效价10 EU/支，批号080524);鲎试剂(TAL，灵敏度0.25 EU·mL－1，批号0906242，湛江安度斯生物有限公司);鲎试剂(TAL，灵敏度 0.25 EU·mL－1，批号 08061012，福州新北生化工业有限公司);细菌内毒素检查用水(批号08060605，福州新北生化工业有限公司 规格:5 mL/支);马来酸甲基麦角新碱注射液马来酸甲基麦角新碱注射液(潍坊中狮制药有限公司;批号:090401、090402、090403;规格:1 mL∶0.2 mg)。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度(λ)复核 按细菌内毒素检查法，用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成 2.0、1.0、0.5、0.25 λ 4个浓度进行实验。结果表明，灵敏度为0.25 EU·mL－1的两批鲎试剂符合规定，见表1。结果显示:鲎试剂灵敏度的测定值(λc)在 0.5～2 λ 之间(包括 0.5λ 和 2λ)，可用于细菌内毒素检查，并以表示灵敏度0.25 EU·mL－1作为鲎试剂的灵敏度。

2.2 马来酸甲基麦角新碱注射液细菌内毒素限值(L)的确定 药品的细菌内毒素限值(L)一般按以下公式确定:L=K/M，式中K为按照规定的给药途径，人用每千克体重每1 h可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K=5 EU·(kg·h)－1;M为人用每千克体重每1 h给药的最大供试品剂量，经过查阅本品说明书，本品的最大给药量为0.2 mg，按照我国人均体重 60 kg 计算，M=3.33 μg·(kg·h)－1，因此细菌内毒素理论限值为:L=K/M=5/3.33=1.5 EU·μg－1。

2.3 供试品的最小有效稀释浓度(MVC) 目前市售的鲎试剂灵敏度(λ)通常在 0.5～0.03 EU·mL－1之间，因此，有效稀释浓度为 0.002～ 0.333 μg·mL－1之间。选用灵敏度为0.25 EU·mL－1鲎试剂时，供试品的最大有效稀释浓度C=λ/L=0.25/1.5=0.1667 μg·mL－1。

表1 鲎试剂灵敏度复核

2.4 供试品干扰初筛试验 用BET水将马来酸甲基麦角新碱注射液(批号 090401)分别稀释成原液、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39、0.195 μg·mL－1系列浓度，每一稀释浓度供试品做2支供试品管和2支供试品阳性对照(即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2.0λ浓度的内毒素溶液)，与鲎试剂混合进行抑制/增强试验，结果表明，供试品在较高浓度时对鲎试剂有干扰作用。在供试品至少稀释至浓度为12.5 ug·mL－1后则对鲎试剂无干扰作用，见表2。

表2 干扰试验预实验结果

2.5 供试品干扰试验 由干扰初筛试验可知，选择灵敏度0.25 EU·mL－1的TAL，用BET水将3批供试品稀释至浓度为12.5 ug·mL－1后进行干扰试验。具体操作步骤如下:每个鲎试剂取18支做内毒素水溶液系列反应，即用0.1 mL BET 水复溶，再分别加已制备的 0.5，0.25，0.125，0.06 EU·mL－1内毒素溶液0.1 mL，每一浓度内毒素4支反应管，水溶液阴性对照(NC)2支反应管;另取54支分3组，每组18支做内毒素供试品溶液系列反应，即用0.1 mL BET水复溶，再分别加已制备的含 0.5，0.25，0.125，0.06 EU·mL－1内毒素的浓度为 12.5 μg·mL－1的供试品溶液 0.1 mL，每一浓度内毒素4支反应管，供试品阴性对照(NPC)2支反应管。不同厂家的鲎试剂各做一份，具体结果见表3，Et均在0.5～2.0 Es范围内，说明供试品稀释至浓度为12.5 μg·mL－1后确已排除干扰作用，在低于或等于此浓度的情况下即可使用内毒素检查法。

2.6 供试品细菌内毒素检查 采用鲎试剂(TAL，灵敏度0.25 EU·mL－1，批号0906242，湛江安度斯生物有限公司)，按照《中国药典》附录XI E对供试品(批号:090401090402090403)进行细菌内毒素的检查，结果3批供试品每μg马来酸麦角新碱含内毒素的量均小于1.5 EU。

表3 干扰试验结果

3 讨论

3.1 通过实验表明，本法可用马来酸甲基麦角新碱注射液细菌内毒素的检查，检查时只要将其至少稀释至浓度为12.5 μg·mL－1，在低于或等于此浓度的情况下，选择相应灵敏度的鲎试剂即可进行本品的细菌内毒素检查。

3.2 不同鲎试剂对供试品的反应有差异。本实验采用两种不同批号的鲎试剂同时进行干扰试验，得到了较为满意结果。