宁神补心片的质量标准研究

2011-04-12李世杰曲银锋

中国医药科学 2011年7期

李世杰付红曲银锋

（河南中医学院第一附属医院，河南郑州450000）

宁神补心片收载于部颁药品标准中药成方制剂第二十册[1]，原标准仅规定了丹参的薄层色谱鉴别项，无含量测定项目，无法对产品进行有效的质量控制。本文增加了五味子的薄层色谱鉴别，同时采用高效液相色谱法对制剂中的丹酚酸B进行含量测定，为该制剂的生产提供质量控制依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

AE240型双量程分析天平；三用紫外分析仪；安捷伦1100高效液相色谱仪。

五味子甲素对照品（批号：110764-200408）、丹酚酸B对照品（批号：111562-200605）均由中国生物制品检定所提供；宁神补心片样品及阴性对照样品由河南某中药有限公司提供。

1.2 五味子的薄层鉴别[2]

取本品10片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30mL，加热回流1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。取缺五味子的阴性对照样品，照供试品溶液制备方法，同法制得缺五味子阴性对照溶液。另取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各3μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品无干扰。结果见图1。

图1 五味子薄层色谱鉴别

1.3 含量测定

1.3.1 色谱条件安捷伦TC-C18（2）色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59），流速1.0mL/min，检测波长286nm。分离度大于1.5，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。

1.3.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品7mg，置50mL棕色量瓶中，加75%甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹酚酸B 0.14mg）。供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，密塞，称定重量，加热回流1h，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。缺丹参的阴性对照溶液的制备：取缺丹参的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

1.3.3 干扰性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液缺丹参阴性对照溶液各10μL进样，结果表明：阴性样品溶液HPLC图谱中在与对照品HPLC图谱中相同保留时间处无吸收峰，阴性无干扰。

1.3.4 线性关系的考察精密取丹酚酸B对照品溶液，分别制成浓度为0.0359mg/mL、0.0718mg/mL、0.1436mg/mL、0.2154mg/mL、0.2872mg/mL的溶液进样测定，以峰面积积分值为纵坐标，丹酚酸B的进样浓度为横坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程：Y=7033.71324X+1.03310，r=1.0000，结果表明，丹酚酸 B在0.359～2.872μg之间呈良好的线性关系。

1.3.5 精密度试验取浓度为0.1436mg/mL的丹酚酸B对照品溶液，分别连续进样6次，测定丹酚酸B的峰面积，结果平均值为1010.5435，RSD为0.32%，表明该方法精密度良好。

1.3.6 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8h测定丹酚酸B峰面积，结果平均值为986.0676，RSD为0.44%，表明该供试品溶液在8h内稳定。

1.3.7 重现性试验精密称取同一批号样品0.5g，6份，照供试品溶液制备方法制备溶液，测定丹酚酸B的含量，结果其含量的平均值为3.6303mg/片，RSD为0.48%，表明该方法重现性良好。

1.3.8 加样回收率试验精密称取同一批号已知含量（丹酚酸B含量3.6303mg/片）样品0.25g，6份，分别加入丹酚酸B对照品2.81mg、3.51mg、4.21mg，两份为1组，每组按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液。分别测定丹酚酸B的含量。结果低、中、高3种加入量的回收率依次为99.72%、99.25%；99.32%、99.81%；99.60%、99.41%。平均加样回收率为99.5%，RSD为0.23%，表明该方法的加样回收率符合要求。

1.3.9 样品含量测定按照供试品溶液制备方法对10批产品进行测定，丹酚酸B的含量分别为：3.624、3.546、3.608、3.387、3.634、3.540、3.602、3.631、3.636、3.620（mg/片）。