彭晓峰,余志金,杨清绪,许岸高

广东惠州市中心人民医院 1.病理科;2.消化内科,广东惠州 516001;3.惠州市医学研究所

胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)是最常见的胃肠道间叶源性肿瘤[1]。DOG1是新发现的GIST诊断标志之一,是由人类11q13上的CCND1-EMS1基因座所编码的8次穿膜蛋白[2]。本研究收集我院72例GIST,探讨DOG1在GIST中的表达,评价其在GIST诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1 材料 共 72例胃肠道间质瘤,20例平滑肌肿瘤, 34例神经鞘瘤及28例孤立性纤维性肿瘤。石蜡组织块均来自广东省惠州市中心人民医院 2002年 ～2009年病理科存档蜡块。所有GIST病例均经规范化诊断。

1.2 试剂 一抗为DOG1、CD117、CD34、SMA、S-100。 DOG1为兔抗人单克隆抗体,为即用型。二抗为生物素化兔抗鼠。三抗为抗生物素的辣根过氧化物酶标记的抗体。均购自福建迈新公司。抗原修复液为枸橼酸钠抗原修复液(pH 6.0);显色剂为DAB;以PBS为缓冲液。

1.3 免疫组化 采用免疫组化S-P法。4μm厚切片常规脱蜡至水,置0.01 mol/L枸橼酸钠抗原修复液(pH 6.0)中高温修复抗原15min,保温10m in,自然冷却至室温。PBS洗3次×5 min。滴加一抗,置4℃冰箱过夜,PBS洗3次×5min。滴加生物素标记二抗(1∶200),37℃孵育30min,PBS洗3次×5min。过氧化物酶标链酶素一亲和素复合物(1∶200),37℃孵育30 min,PBS洗3次×5m in。新鲜配制DAB显色,苏木素复染胞核,透明并固封。采用福建迈新公司提供的阳性对照片;以PBS液代替一抗作空白对照。结果判定:每张切片由2位观察者双盲交换判断,DOG1的阳性部位在胞膜或胞浆,阳性信号为棕黄色、棕褐色,每例切片至少随机选择 10个 HPF,取平均值,每例切片阳性细胞数平均≥10%为阳性,否则为阴性。

1.4 统计学处理 SPSS 13.0统计软件分析,组间比较用卡方检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床资料 72例患者中,男 45例,女27例。年龄 21～78岁,中位年龄 56岁。肿瘤发生部位:胃 37例(51%),小肠19例(26%),大肠5例(7%),食管2例(3%),胃肠外(腹膜后、肠系膜及盆腔等)9例(13%)。肿瘤危险程度:极低组 18例,低组26例,中等组 11例,高组 17例。随访 1～8年,随访 48例,其中局灶浸润 1例,淋巴结转移 2例,复发 3例。

2.2 组织学特点 本组病例梭形细胞型55例,上皮样细胞型 14例,混合型 3例。梭形细胞呈长或短梭形,细胞核两端尖细或钝圆,有的可见核仁及核周空泡;瘤细胞排列成束状、漩涡状或栅栏状。上皮样细胞呈圆形或多边形,胞浆丰富、透明,嗜伊红色,有的呈印戒样,有时可见瘤巨细胞;瘤细胞排列成片状、巢状。混合型由梭形和上皮样细胞混合组成(见图1～3)。

极低风险性组病例细胞无明显异型性,瘤细胞欠丰富,核分裂数≤5/50 HPF,无出血、坏死。低风险性组病例细胞较丰富,轻度异型,无出血或坏死,3例可见囊性变,16例可见核分裂,核分裂数 1～5个/50 HPF。中等风险性组病例细胞丰富,中度或高度异型,3例可见出血或坏死;4例核分裂数≤5个/50 HPF,7例6～10个/50HPF。高风险性组病例瘤细胞丰富密集,中到高度异型,9例伴出血或坏死,1例未见核分裂,8例核分裂≤5个/50 HPF,8例核分裂≥10个/50 HPF。

2.3 免疫表型 DOG1和CD117在GIST阳性表达率显著高于其他多种梭形细胞肿瘤的表达(P＜0.001)。且DOG1在GIST中阳性率较CD117及CD34高,敏感性更强。CD117在平滑肌肿瘤及孤立性纤维性肿瘤中表达率为3.3%及3.6%,CD34在平滑肌肿瘤、神经鞘瘤及孤立性纤维性肿瘤中表达率分别为6.6%、5.9%及89.2%,而DOG1均为阴性表达,说明在GIST中DOG1特异性较CD117及CD34更高。且9例胃肠外GIST中DOG1、CD117及CD34的阳性率分别为100%、77.8%及44.4%(见表1)。DOG1和CD117阳性表达率在各风险程度组两两比较中差异均无统计学意义(P＞0.05)(见表2)。CD117阴性者中DOG1阳性表达率为37.5%(3/8)(见图4、5)。

表1 多种梭形细胞肿瘤中各抗体阳性表达率(%)Tab 1 Positive exp ression rates o f antibodies in many kinds of spindle-shaped cell tumors(%)

表2 各组GIST中各抗体阳性表达率(%)Tab 2 Positive expression rates of antibodies in GIST(%)

3 讨论

GIST起源不明,目前认为可能起源于Cajal间质细胞,二者均表达KIT受体酪氨酸激酶CD117,其特征性改变是原癌基因c-kit功能获得性改变和蛋白产物CD117的表达。该肿瘤形态复杂,与多种肿瘤在形态上有重叠,如梭形细胞型与平滑肌肿瘤、神经鞘瘤及孤立性纤维性肿瘤,上皮样细胞型与癌。随着格列卫等靶向药物的问世,GIST患者术后复发的危险显著降低,但该药物价格昂贵。故GIST的诊断与鉴别诊断尤为重要,免疫组化是最重要的确诊依据。CD117和CD34是目前最主要的抗体,但在诊断过程中也存在一些问题:相当一部分CD 117阴性的GIST患者对格列卫敏感[3];而CD34在多种形态与GIST交叉的软组织肿瘤中也可表达。DOG1是新发现的GIST诊断标志物之一[4],本研检测DOG1在GIST中的表达,评价其在GIST诊断中的价值。

本研究检测DOG1在GIST中阳性率为93.0%, CD117为88.9%,而CD34为72.2%,DOG1较CD117略高,敏感性更强;且形态上与GIST存在交叉几种间叶源性肿瘤中DOG1均为阴性表达,而CD117在平滑肌肿瘤及孤立性纤维性肿瘤中表达率为 3.3%及3.6%,CD34则分别为6.7%、5.9%及89.3%,说明在GIST中,DOG1特异性较CD117和CD34均更高。Espinosa等[2]研究中发现DOG1在87%(370/425)GIST中表达,而CD117和CD34表达率分别为74%(317/ 428)和59%(254/430);在 935例软组织肿瘤中仅有0.3%(1/326)平滑肌肉瘤,2.56%(1/39)滑膜肉瘤表达DOG1,与本研究结果相似。且9例胃肠外GIST中DOG1、CD117及CD34的阳性率为100%、77.8%及44.4%。故我们认为DOG1在诊断GIST中具有较高敏感性和特异性,可与CD117和CD34等抗体进行联合检测,提高检出率,作为筛查靶向治疗的指标之一,在GIST的诊断和鉴别诊断中是一种非常有价值的抗体。

另外,研究还发现DOG1和CD117阳性表达率在各风险程度组两两比较中差异均无统计学意义,说明DOG1和CD117表达与肿瘤分化程度无关。在改良的NIH危险度分级中[5],新加了一条标准:只要肿瘤破裂,无论其大小、核分裂数及部位,均评价为高危险度。

在8例CD117阴性病例中,DOG1阳性表达率为37.5%(3/8)。研究显示超过1/3的DOG1阳性而CD117阴性的病人[6],格列卫治疗有效。故 DOG1这一新抗体在GIST诊断中的使用,能为靶向药物治疗的筛查提供更多的参考依据。

[1]Rutkowski P,SymonidesM,ZdzienickiM,etal.Developments in targeted therapy of advanced gastrointestinal stromal tumors[J].Recent Pat Anticancer Drug Discov,2008,3(2):88-99.

[2]Espinosa I,Lee CH,Kim MK,et al.A novelmonoclonal antibody against DOG1 is a sensitive and specificmarker for gastrointestinalstromal tumors[J].Am JSurg Pathol,2008,32(2):210-218.

[3]West RB,CorlessCL,Chen X,etal.REGULARARTICLES:the novelmarker,DOG1,isexpressed ubiquitously in gastrointestinalstromal tumors irrespective of KIT or PDGFRA mutation status[J].Am J Pathol,2004,65(1):107-113.

[4]Miwa S,Nakajima T,MuraiY,et al.Mutation assay of thenovelgene DOG1 in gastrointestinal stromal tumors(GISTs)[J].J Gastroenterol,2008,43(7):531-537.

[5]Joensuu H.Risk stratification ofpatients diagnosed with gastrointestinal stromal tumor[J].Hum Pathol,2008,39(10):1411-1419.

[6]NovelliM,Rossi S,Rodriguez-Justo M,et al.DOG1 and CD 117 are the antibodies of choice in the diagnosis of gastrointestinal stromal tumours[J].Histopathology,2010,57(2):259-270.