李全斌何开勇

（1湖北中医药高等专科学校，湖北 荆州 434020；2湖北省食品药品监督检验研究院，湖北 武汉 430071）

齐墩果酸(Oleano lic acid)是一种齐墩果烷型五环三萜类化合物，广泛存在于青叶胆全草、女贞子果实、白花蛇舌草等药用植物中，国内外研究表明齐墩果酸有护肝、解肝毒、降糖、降脂、治疗胃溃疡、抗炎、抗HIV病毒、抗癌、抗突变、抗氧化、利尿等作用[1-6]。目前许多中药及其制剂常选用齐墩果酸的含量作为其质量控制的指标。本文拟对齐墩果酸含量测定方法的研究进展作一综述。

1 分光光度法

1.1 可见分光光度法

孙忠文等[7]据齐墩果酸与5%香草醛-冰醋酸溶液及高氯酸加热后，再加冰醋酸在548 nm处有最大吸收的特性，建立可见分光光度法测定齐墩果酸的含量，平均回收率为99.66%，RSD=1.02%(n=5)。周昕等[8]用该法测定白花蛇舌草注射液中齐墩果酸的含量。

1.2 紫外分光光度法

李必波等[9]用尤尼柯UV-2102PCS型紫外可见分光光度计，在207 nm波长处，测定齐墩果酸缓释滴丸的药物含量，齐墩果酸在20～80μg/m L范围内线性关系良好r=0.9995(n=7)，回收率在98%～102%之间，RSD＜1%(n=3)。邓世星等[10]在210 nm波长下，以甲醇作溶剂，用紫外光谱法测定齐墩果酸含量，齐墩果酸在4～120μg/m L范围内线性关系良好，r= 0.999 3，平均回收率为99.0%，RSD为0.8%(n=5)。该法简便，快速，结果准确，重现性好。

2 薄层扫描法

杨波等[11]用薄层色谱扫描法测定黄花败酱总皂苷胶囊中齐墩果酸的含量。供试品溶液制备如下：取内容物，精密称定，加10%硫酸溶液，于水浴中回流，放冷，置分液漏斗中，用15 m L醋酸乙酯分3次萃取，分取醋酸乙酯层，合并，水浴蒸干，加少量醋酸乙酯溶解残渣，转入10m L量瓶中，用醋酸乙酯定容作为供试品溶液。薄层条件：薄层板为含0.3%羧甲基纤维素钠的硅胶H板，石油醚-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，预饱和15 min，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，置105℃干燥箱烘约10 m in至呈紫红色斑点，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定。波长：λs=530nm，λR=700 nm，SX=3，此系统分离效果好，斑点前后无杂质干扰，适于定量分析。该法灵敏，简便，准确。

3 高效液相色谱法

3.1 HPLC法

万元松等[12]采用高效液相色谱法用于肠泰颗粒中齐墩果酸的含量测定。以Kromasil KR100-C18为分离柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺 (85∶15∶0.04∶0.02)为流动相，检测波长为220 nm，柱温20℃，齐墩果酸进样量在在2.04～10.21μg范围内线性关系良好，相关系数为0.999 2，平均回收率为98.60%，RSD=1.76%，方法可靠，简单可行。田吉等[13]以KromasilC18为色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，建立楤木及其提取物中齐墩果酸的HPLC含量测定方法。

3.2 RP-HPLC法

邹盛勤等[14]采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定冬凌草中齐墩果酸的含量。样品处理基本步骤：将样品恒温干燥，粉碎，精密称取，加95%乙醇溶液超声提取，冷却至室温，滤过，滤渣洗涤2次，合并滤液置50 m L量瓶中，乙醇定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，得样品溶液。色谱柱为NUCLEO.DURC18RP柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水(87∶13)，流速0.8 m L/m in，光电二极管阵列检测器，检测波长210 nm，柱温25℃，在选定色谱条件下线性范围良好，齐墩果酸的样品加样回收率为98.7%，RSD为0.9%。邹盛勤等[15]用反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测器联用法对紫苏子、白苏子中的熊果酸和齐墩果酸进行了分离和含量测定，色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水(87∶13)，检测波长210 nm，柱温28℃，流速0.8 m L/m in；齐墩果酸进样量在0.05～2.00μg之间线性关系良好，平均加样回收率为98.7%，RSD为1.2%（n=6）。江铁军[16]以固相萃取(SPE)进行样品供试液的前处理，用RP-HPLC法测定齐墩果酸的含量，用SPE对供试品溶液进行前处理，可有效消除女贞子药材中杂质成分对末端吸收波长的干扰，该法灵敏、准确，重现性好。

3.3 UPLC法

喻喜华等[17]建立山茱萸药材中齐墩果酸的超高效液相色谱含量测定方法。以ACQUITY UPLCTMHSSCl8色谱柱（2.1 mm×100mm，1.8μm），以甲醇-0.1%甲酸水(85∶15)为流动相，流速：0.2 m L/m in，检测波长：210 nm，齐墩果酸在0.010～0.500 mg/m L(r=0.999 9)与峰面积线性关系良好，平均回收率分别为100.4%，RSD为1.8%，该法快速，简便，准确。

3.4 RP-HPLC-MS法

3.5 LC-MS法

杨宜华等[19]用液质联用(LC-MS)法测定了白花蛇舌草中齐墩果酸含量。色谱柱HypersilODSC18(150mm×4.6mm，5μm)，流动相甲醇-0.005%冰醋酸(75∶25)，二极管阵列检测器，流速0.2 m L/min，柱温45℃，质谱采用大气压化学离子化探头，选择性离子流模式(正离子)，齐墩果酸加样回收率为98.87%，RSD为3.09%，该法快速简便，灵敏度高，重现性好。

3.6 HPLC-ELSD法

吴柳春[20]建立三姐妹药材的TLC鉴别法以及药材中齐墩果酸和熊果酸的HPLC-ELSD含量测定法。色谱柱为Shim-pack VP-ODS（4.6mm×250 mm，5μm），甲醇-0.5%醋酸铵(85∶15)为流动相，流速1.0 m L/min，Alltech ELSD 2000蒸发光散射检测器，用HPLC-ELSD法对药材中齐墩果酸和熊果酸进行定量。齐墩果酸线性范围为0.42～2.5μg（r=0.999 8），加样回收率为98.3%（RSD=1.4%），李文春等[21]用该法测定红果槲寄生中齐墩果酸的含量，本法简便，准确，灵敏度高，重现性好。

4 毛细管电泳法

黄雅燕等[22]用毛细管电泳法快速测定齐墩果酸片的含量，未涂层弹性石英毛细管(75μm×50cm，有效长度40 cm)，压力：3.0kPa；进样时间：5 s；分离电压：25 kV；柱温：25℃；检测波长：200 nm；运行缓冲液：含5%(体积分数)甲醇的20mmol/L硼砂溶液(pH9.4)；运行时间：10min。齐墩果酸的线性范围为2.58～660μg/m L(r=0.999 7)，平均回收率为99.47%，RSD=1.28%(n=6)。朱培仪等[22]用毛细管区带电泳、高频电导测定水线草中齐墩果酸的含量测定方法：未涂层弹性融硅石英毛细管柱(55 cm×75μm ID)，有效长度50cm；以1.2mmol/L三乙胺-盐酸 (pH10.0)，0.24mmo1/L β-环糊精为运行缓冲液，分离电压12.5 kV，重力进样10 s (高度20 cm)，布洛芬为内标。在3.9～39.0μg/m L(r=0.999 1)范围内齐墩果酸的测定浓度与峰面积积分值的线性关系良好；平均回收率为96.5%，RSD=1.98%(n=6)。本法简便，准确，快速，重现性好。

5 其他

齐墩果酸的含量测定方法很多，较早应用的是比色法，但操作复杂，显色误差较大，对酸性杂质无分辨力和选择性，故近年来应用较少；药典也曾用酸碱非水滴定法测定含量，但终点不易掌握，专属性差，误差较大；有学者利用齐墩果酸具有旋光性的特点，建立了旋光法测定齐墩果酸的含量[24-25]，该法准确、可靠、简便、灵敏、快速，但专属性差；薄层扫描法应用较广泛；高效液相(HPLC)法具备操作快速和准确性高的优势，有正在取代其他方法的趋势，但以上方法也存在费时长、仪器价格贵等问题。随着含齐墩果酸中药的指纹图谱和质量标准方面研究的不断深入，简便、快速、准确、高效的检测方法将会不断涌现，齐墩果酸的分离和含量测定技术将会日臻完善，为制剂中齐墩果酸的质量控制提供更可靠的依据。

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