红鱼眼醇提物镇痛抗炎作用的实验研究Δ

2011-01-09秦贻强蔡小玲桂林医学院附属医院药剂科桂林市541001

中国药房 2011年43期

秦贻强，李江，蔡小玲（桂林医学院附属医院药剂科，桂林市541001）

红鱼眼是大戟科植物无毛龙眼睛Phyllanthus reticulates Poir.Var.glaber Muell.Arg.或龙眼睛P.reticulates Poir.的干燥茎，具有祛风活血、散瘀消肿的功效[1]，为广西尤其是壮族民间常用药味。临床中多采用其复方内服或外用等疗法治风湿性、类风湿性、骨性关节炎[2，3]。红鱼眼作为治疗风湿痹症的药物运用较广，但是仅在临床应用方面有报道，而相关药理研究甚少，不利于其安全用药与进一步开发使用。因此，本研究采用相应动物模型，对红鱼眼醇提物的镇痛、抗炎作用进行了探讨，以期为临床用药提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

R-200型旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；UV2550型紫外分光光度计（日本岛津公司）；HH-W600型数显三用恒温水浴箱（金坛市科析仪器有限公司）；微量进样器（芬兰Thermo Finnpipette公司）；BT224S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

1.2 试药

红鱼眼购自广西南宁市中尧药材市场，经桂林医学院药学系天然药物化学教研室唐爱莲副教授鉴定为真品；吲哚美辛肠溶片（广东华南药业集团有限公司，批号：081108）；盐酸曲马多缓释片（深圳南方盈信制药有限公司，批号：20090801）。

1.3 动物

SPF级昆明种小鼠150只，♀♂兼半，体重（20±2）g；SPF级SD大鼠50只，♂，体重（200±20）g，均由桂林医学院实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（桂）2007-0001）。

2 方法与结果

2.1 醇提物的制备

药材粉碎为粗粉，采用10倍量75%乙醇水浴回流提取，每次2 h，共提取2次，过滤后合并滤液，于60℃减压回收至无醇味，分别配制成所需浓度的供试液，待用。

2.2 红鱼眼醇提物对小鼠热板法痛阈值的影响

取♀小鼠若干，置于（55±0.5）℃恒温热板上，以舔后足作为痛觉指标，秒表记录痛阈值，每只小鼠测定2次，中间间隔3 min，取其均值为正常痛阈值。取正常痛阈值在5～30 s的小鼠50只，随机分为模型对照（生理盐水20 mL·kg-1）、盐酸曲马多（0.04 g·kg-1）和红鱼眼醇提物高、中、低剂量（30、20、10 g·kg-1）组。ig给药后，于30、60、120 min分别测定痛阈值。若测定中小鼠痛阈值＞30 s，则按照30 s计算。结果表明，高、中、低剂量红鱼眼醇提物均能不同程度显著提高小鼠对热反应的痛阈值（P＜0.01或P＜0.05），提示红鱼眼醇提物对小鼠由刺激引起的疼痛具有良好的镇痛作用。红鱼眼醇提物对小鼠热板法痛阈值的影响见表1。

2.3 红鱼眼醇提物对小鼠醋酸扭体反应的影响

取小鼠50只，♀♂兼半，随机分为模型对照（生理盐水20mL·kg-1）、吲哚美辛（20 mg·kg-1）和红鱼眼醇提物高、中、低剂量（30、20、10 g·kg-1）组，每组10只。ig给药，每天1次，连续3 d。末次给药后30 min每只小鼠ip新配制的0.6%醋酸溶液0.1 mL·10 g-1，观察并记录小鼠的扭体潜伏期和15 min内扭体反应的次数。结果表明，仅吲哚美辛组的扭体抑制率与模型对照组比较差异显著（P＜0.05），其余各组均无显著差异，提示红鱼眼醇提物对小鼠ip醋酸引起急性腹膜炎而产生的疼痛无明显的镇痛作用。红鱼眼醇提物对小鼠醋酸扭体反应的影响见表2。

表1 红鱼眼醇提物对小鼠热板法痛阈值的影响（±s，n＝10）Tab 1 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the pain threshold in hot plate metho（d±s，n＝10）

与模型对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别模型对照组盐酸曲马多组红鱼眼醇提物低剂量组红鱼眼醇提物中剂量组红鱼眼醇提物高剂量组剂量/g·kg-1 120 min 10.7±3.5 13.6±4.4 14.6±4.3 16.0±5.6＊14.7±5.8-0.04 10 20 30给药前痛阈值/s 14.2±3.4 15.0±4.4 13.3±2.9 14.7±1.8 14.2±3.9给药后痛阈值/s 30 min 9.7±2.2 18.5±7.2＊＊12.3±2.7＊15.7±2.0＊＊14.7±2.5＊＊60 minimages/BZ_205_394_507_396_507.pngimages/BZ_205_329_530_334_530.png10.7±2.5 14.9±3.6＊14.3±2.8＊14.4±4.0＊8.8±2.0

表2 红鱼眼醇提物对小鼠醋酸扭体反应的影响（±s，n＝10）Tab 2 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the acetic acid writhing tes（t±s，n＝10）

与模型对照组比较：＊P＜0.05vs.model control group：＊P＜0.05

组别模型对照组吲哚美辛组红鱼眼醇提物低剂量组红鱼眼醇提物中剂量组红鱼眼醇提物高剂量组扭体抑制率/%-31.8＊8.8 1.4 8.9剂量/g·kg-1-0.02 10 20 30扭体次数/次14.8±4.8 10.1±2.8 13.5±3.8 14.6±3.8 13.9±4.5

2.4 红鱼眼醇提物对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀度的影响

分组、给药同“2.3”项下方法。ig给药，每天1次，连续7 d。末次给药60 min后，将30 μL二甲苯均匀涂抹于小鼠右耳廓两面致炎。致炎30 min后，脱颈椎处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，并以直径8 mm打孔器分别在左右耳对称部位打下圆形耳片，分别用电子天平称重，计算肿胀度和肿胀抑制率。小鼠耳廓肿胀程度以每鼠左右耳片重量之差的平均值来表示[肿胀抑制率（%）＝（模型对照组肿胀度－用药组肿胀度）/模型对照组肿胀度×100%]。结果表明，红鱼眼高、中剂量组的耳廓肿胀度与模型对照组比较差异显著（P＜0.01或P＜0.05），提示红鱼眼醇提物对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀能起到一定的抗炎作用。红鱼眼醇提物对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀度的影响见表3。

表3 红鱼眼醇提物对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀度的影响（±s，n＝10）Tab 3 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the mice ear swelling induced by xylen（e±s，n＝10）

与模型对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

抑制率/%-34.01 8.50 11.53 29.37组别模型对照组吲哚美辛组红鱼眼醇提物低剂量组红鱼眼醇提物中剂量组红鱼眼醇提物高剂量组剂量/g·kg-1-0.02 10 20 30耳廓肿胀度/mg 12.98±1.41 8.57±0.67＊＊11.88±1.36 11.49±1.13＊9.17±0.95＊＊

2.5 红鱼眼醇提物对大鼠角叉菜胶致足趾肿胀的影响

取大鼠25只，♂，均分为模型对照（生理盐水5 mL·kg-1）、吲哚美辛（0.015 g·kg-1）和红鱼眼醇提物高、中、低剂量（7.5、5、2.5 mg·kg-1）组。ig给药，每天1次，连续3 d。末次给药后立即于每只大鼠右后足爪部sc 0.1 mL的1%角叉菜胶致炎，分别于致炎前和致炎后1、2、3、4 h用毛细管放大法测量右后足容积，以计算肿胀抑制率[肿胀抑制率（%）＝（模型对照组肿胀度－给药组肿胀度）/模型对照组肿胀度×100%]。结果表明，高、中、低剂量红鱼眼醇提物对大鼠足趾肿胀均有不同程度的抑制作用，高、中剂量红鱼眼醇提物在60～240 min内抑制作用稳定，而低剂量红鱼眼醇提物至180 min后才出现抑制作用，提示红鱼眼醇提物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的抑制作用时间较长。红鱼眼醇提物对大鼠角叉菜胶致足趾肿胀的影响见表4。

表4 红鱼眼醇提物对大鼠角叉菜胶致足趾肿胀的影响（±s，n＝5）Tab 4 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on rat toe swelling induced by carrageena（n±s，n＝5）

与模型对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别模型对照组吲哚美辛组红鱼眼醇提物低剂量组红鱼眼醇提物中剂量组红鱼眼醇提物高剂量组剂量/g·kg-1注射后不同时间的足肿胀率/%-0.015 2.5 5.0 7.5正常足容积/mL 1.03±0.02 1.04±0.01 1.01±0.05 1.02±0.01 1.07±0.01 60 min 27.74±6.84 21.24±5.83 26.20±3.46 17.45±2.69＊＊13.99±2.57＊＊120 min 38.12±8.39 21.23±3.10＊＊32.96±4.63 24.13±2.29＊＊27.42±4.97＊180 min 36.81±6.46 14.66±2.22＊＊25.47±3.17＊＊22.0±1.50＊＊25.21±7.60＊240 min 35.18±5.66 11.81±4.59＊＊18.37±2.98＊＊16.67±0.86＊＊20.56±7.35＊

2.6 红鱼眼醇提物对大鼠角叉菜胶性炎性渗出液中前列腺素（PG）E2含量的影响[4]

分组、给药与炎症复制同“2.5”项下方法。角叉菜胶致炎4 h后颈椎脱臼处死大鼠，齐踝关节剪下炎性足，称重，剥皮，充分剪碎，置于8 mL生理盐水和2 mL甲醇中浸泡过夜，10 000 r·min-1离心3 min，取上清液0.6 mL，置于10.0 mL量瓶中，加入0.5 mol·L-1氢氧化钾-甲醇溶液2 mL，在50℃水浴中异构化20 min，放冷至室温，然后用甲醇定容，摇匀，于278 nm波长处测吸光度（A），以每1 g炎性组织相当的A值表示PGE2的含量（A/g足重）。结果表明，红鱼眼醇提物高剂量组与模型对照组比较PGE2含量显著降低（P＜0.05）。红鱼眼醇提物对大鼠角叉菜胶性炎性渗出液中PGE2含量的影响见表5。

表5 红鱼眼醇提物对大鼠角叉菜胶性炎性渗出液中PGE2含量的影响（±s，n＝5）Tab 5 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the content of PGE2in the carrageenan induced inflammatory effusion in ra（t±s，n＝5）

与模型对照组比较：＊P＜0.05vs.model control group：＊P＜0.05

组别模型组吲哚美辛组红鱼眼醇提物低剂量组红鱼眼醇提物中剂量组红鱼眼醇提物高剂量组0.202 1±0.009 9 0.183 4±0.009 2＊0.201 4±0.028 1 0.220 5±0.019 4 0.181 0±0.016 0＊-0.015 2.5 5.0 7.5 1.608 3±0.081 6 1.653 0±0.085 8 1.580 2±0.087 3 1.642 0±0.111 1 1.732 2±0.116 3 0.324 8±0.018 4 0.303 0±0.018 2 0.319 8±0.059 0 0.363 6±0.054 8 0.313 0±0.029 8 PGE2含量/ng·g-1剂量/g·kg-1足重/g A值

3 讨论

本研究表明，红鱼眼醇提物在热板法镇痛实验中，能不同程度提高小鼠的痛阈值，起到一定的镇痛作用；而抗炎实验中其不仅能减轻二甲苯诱导的小鼠耳肿胀程度，并能不同程度抑制角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀反应，高剂量作用下还可减少角叉菜胶致炎的鼠足渗出液中PGE2的含量，说明其具有一定的抗炎作用，且作用机制可能与抑制炎性部位PGE2的生成有关。本研究结果论证了红鱼眼传统功效与现代药理研究的一致性，可为指导临床合理用药，并将其开发成高效、低毒、价廉、疗效确切的具有抗风湿作用的新型天然药物提供理论依据。因此，进一步深入开展红鱼眼药理学方面的研究，对抗风湿疾病的治疗及其开发利用有着重要意义。

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准（1990年版）[S].南宁：广西科学技术出版社，1992：52.

[2] 王柏灿.壮医火功加熨浴疗法治疗痹病89例临床观察[J].中国中医药信息杂志，2007，14（8）：60.

[3] 钟丽雁，李凤珍，谢爱泽.壮药内服加药熨治疗膝关节骨性关节炎30例观察[J].实用中医药杂志，2009，25（6）：358.

[4] 崔晓燕，王素霞，侯永利.金银花提取物的抗炎机制研究[J].中国药房，2007，18（24）：1 861.