张璐，赵峰，李春生，林子清

（中国刑事警察学院法医学系，沈阳 110035）

鸭子股骨组织形态学特征的研究

张璐，赵峰，李春生，林子清

（中国刑事警察学院法医学系，沈阳 110035）

目的研究鉴别鸭子股骨组织学的形态特征。方法取50只2年生以上成年北京鸭的左股骨中段做成骨骼组织学切片，经过固定、脱钙、冰冻骨骼组织切片及硫堇苦味酸染色，在显微镜下观察，将显微镜下的图像录入电脑，利用专业软件进行分析、统计数据。结果鸭子股骨骨单位形态大多为圆形和椭圆形，骨单位排列多无规律。内、外环骨板分层不明显，主要以呈层状排列的梭形骨细胞的形式存在。内环骨板多为较厚的板层状骨，界限较明显，外环骨板相对内环骨板较薄，界限尚明显。骨陷窝数量较多，在片子中未见到骨小梁，间骨板几乎没有。非哈氏管数量较少，平均每个视野一个左右。结论鸭子股骨组织学形态特征明显，本研究数据为骨骼组织学的研究积累了资料，有助于种属鉴别的开展，也为研究生物进化提供了新的观察指标。

鸭子；股骨；骨组织；骨切片；种属鉴别

鸭子是日常生活中常见的动物，但目前对鸭子骨骼的研究比较少。国内外的学者也只是对其部分骨组织形态学特征进行了简单的描述。本文对鸭子股骨组织学特征进行了较为系统的研究，不仅为生物的种属鉴别提供了依据，还为生物进化的研究提供了参考性资料。

1 材料与方法

1.1 材料

在集市上购买2年生以上成年北京鸭50只，雌雄不限，处死后取其左股骨的中段，备检。处死的方法符合动物实验的伦理要求。

1.2 方法

1.2.1 固定：取上述检材，将每段股骨中段锯成厚3～5 mm的横段，放入10%福尔马林溶液中固定3～5 d。

1.2.2 脱钙：分别按照murayama法和Alexander法配制甲酸脱钙液和硝酸脱钙液［1］。

1.2.3 包埋切片：将脱钙后的骨组织流水冲洗24 h后，用冷冻组织包埋剂（OCT）包埋，放在英国BROTHER公司的冷冻切片机冷冻室内3～5 min，使其完全冻结后，切成20 μm厚的薄片，放入无水乙醇中备用。

1.2.4 染色封片：按常规配制硫瑾/苦味酸染色液，室温下，采用游离方法染色，用中性合成树胶封片［2］。

1.3 切片观察指标及统计学分析

采用Nikon ECLIPSE 80i病理图像处理系统× 200镜下观察哈氏系统的数量、形态、直径、面积及排列，间骨板的数量、形态、排列、面积百分比、环层骨板形态，内、外环骨板的厚度及相对厚度，非哈氏管的数量。×400镜下观察哈氏系统环层骨板数，哈氏管直径及面积，间骨板环层骨板数，骨陷窝数量、排列和面积。实验数据利用SPSS统计学软件进行分析。

2 结果

2.1 骨单位

鸭子股骨的骨单位大部分为圆形和椭圆形，且愈靠近内环骨板骨单位愈多，面积愈大，边界愈清晰，而外环骨板附近骨单位较少，面积较小，与周围骨基质分界不明显。单位视野下骨单位数量较少，平均每个视野13.54±1.32个，每个视野最少的只有5个，最多可达24个，多数为10～17个之间。骨单位直径平均为（112.88±7.02）μm，平均面积（9097.42± 2705.62）μm2，其中骨单位面积相差悬殊，小的只有几千μm2，而大的可超过3万μm2。以骨陷窝层数计数环层骨板数，有的只有1层，而有的可达7层，平均每个骨单位3.50±0.47层。哈氏管多为圆形和椭圆形，除少数退化骨单位的哈氏管特别大外，相对于骨单位，哈氏管比较小，平均直径为（19.89±2.27）μm，平均面积为（232.70±88.98）μm2（见图1）。

图1哈氏系统×2 0 0F i g.1 H a s t e l l o y s y s t e ms×2 0 0

2.2 间骨板

鸭子股骨没有发现明显的间骨板。

2.3 内、外环骨板

总体上内环骨板较厚，平均（76.89±14.73）μm，平均相对厚度0.055 μm，边界比较明显。外环骨板比内环骨板稍厚，平均厚（89.11±16.18）μm，平均相对厚度0.056 μm，边界尚清楚。内、外骨板厚薄都不均匀，厚的与薄的之间可以相差数倍，骨板内有的可看到少量哈氏管及骨板层数和边界都不清的不典型骨单位。

2.4 非哈氏管的数量

本实验计数的非哈氏管主要为穿通管，只有几张切片可看到，数量特别少。

2.5 骨陷窝

骨陷窝大而多，平均大小为（38.24±1.47）μm2，数量比较稳定，每个视野下大部分为60～70个左右，平均每个视野（65.88±2.35）个，多数为椭圆形，排列不规则。

2.6 骨小梁

鸭子股骨几乎没有骨小梁，50张切片中，未见明显的骨小梁。

3 讨论

3.1 骨切片制作及染色条件的分析

骨组织在制作切片时，必须脱去钙盐成分。强酸脱钙法脱钙速度较快，但由于酸性过强，其酸化作用致组织结构破坏，时间过长将影响染色效果，因此应随时观察，检测不出钙质成分时则应立即终止脱钙。弱酸脱钙法脱钙时间较长，脱钙不完全切片时会感到阻力大，切片易碎、易裂、易产生皱折。

硫堇染色时间不确定，一般把切片染为棕黄色。染色时间还和染液使用的次数有关，随着使用次数增加，染色时间应相应延长，所以应随时观察染色程度［3］。苦味酸染色时间经比较以45 s染色效果较好，经乙醇脱水，二甲苯透明等步骤后，骨陷窝、骨小管呈棕黑色，骨基质为淡黄至棕黄色，结构比较清晰。

3.2 骨组织特征分析

人的外环骨板走行不规则，波状弯曲，环层骨板间有体积较小的菱形的骨单位。内环骨板与骨密质部的骨单位相连，有明显的分界。内环骨板较厚，波状走行、连续。近内环骨板处可见密集的直径较小的骨单位。人类骨组织间骨板较多，面积百分比大，大多呈新月形结构。有典型的骨小梁结构。而鸭子股骨间骨板极少，几乎没有骨小梁结构，骨单位和骨陷窝的排列不规则，据此特征可与人骨进行鉴别［3～5］。

骨骼化是生物结构复杂化的基础，骨骼系统又是生物形态进化的限制因素。本实验的检验结果还提示我们处在生物进化过程中不同阶段的动物其骨骼的微细结构也显示出不同的进化程度，因此本研究结果不仅能够帮助我们鉴别种属，而且还显示出鸭子在生物进化过程中属于相对低等的动物，对考古学也有很重要的参考价值。

［1］Bruce A.Kimball，Elizabeth A.Mishalanie.Gas chromatographic determination of sodium monofluoroacetate as the free acid in an aqueous solvent［J］.J Chromatogr，1993，634（2）：289－296.

［2］龚志锦，詹榕洲.病理组织制片与染色技术［M］.上海：上海科学技术出版社，1994：280.

［3］张继宗，王国吉，张怀东.人与动物骨组织特征的比较研究［J］.刑事技术，2007，（5）：16－18.

［4］张继宗.骨骼种属鉴定的组织学研究［J］.法医学杂志，2001，17（3）：139－141.

［5］张继宗.人类骨组织特征研究［J］.人类学学报，2008，27（4）：325－330.

（编辑 孙宪民，英文编辑 赵传胜）

The Research of Histomorphological Characteristics of Duck Femora

ZHANG Lu，ZHAO Feng，LI Chun-sheng，LIN Zi-qing
（Department of forensic medicine，China Criminal Police University，Shenyang 110035，China）

ObjectiveTo study the histomorphological characteristics of duck femora.MethodsTake the middle fragment of 50 left duck femora to process histological slices.Observe slices under the microscope and input the image data into computer to conclude statistics.ResultsThe stratification of the inner and outer circumferential lamellae are not distinct，existing in the form of fusiform bonny cells；Most osteons are circle or oval and array irregularly；There are many bone lacunae and there is no bone trabecula.ConclusionThe histomorphological features of duck femora are obviously.These data will help us in species identification and research of biological evolution.

duck；femur；bone tissue；bone slice；species identification

DF795.6

：A

：0258－4646（2010）08－0616－02

国家“十一五”科技支撑项目（2007BAK26B04）

张璐（1976－），女，副教授，博士研究生.

林子清，E－mail：lziqing2003@sohu.com

2010－04－01