贾秋红 郑宗林 Delbert M.Gatlin III 叶金明

病害一直是水产养殖面临的主要问题。病害造成的死亡率上升、生产效益下降，每年都会给水产养殖业造成巨大的经济损失。开发抗生素的替代品一直是研究者工作的重点。虽然在水产行业中功能性饲料还是一个比较新颖的概念，但这代表着科学饲养的新理念，即：饲料的功能应该从仅仅满足养殖水生生物的营养需求，提升到能够提高水生生物的健康水平、提高抗应激能力以及抗病能力上（Gatlin，2002）。运用非抗生素来帮助改善生长，提高饲料利用率，减少应激和死亡率，是未来的研究方向。

益生素是一种被添加到日粮中改善肠道微生物平衡的功能性产品，已被水产养殖业关注（Gatesoupe，1999；Irianto 等，2002）。它是一种能够增进宿主健康的非消化性的成分，通过选择性地刺激肠道内一种或有限数量的细菌生长和激活细菌代谢来提高宿主肠道平衡（Gibson等，1995）。包括甘露聚糖（White等，2002）、乳糖（Szilagyi，2002）、果糖和菊粉（Teitelbaum等，2002）等。啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是来自发酵工业中的天然产品，它含有各种免疫增强物质，如：β-葡萄糖、核酸和甘露聚糖等，能够提高鱼的免疫反应（Siwicki等，1994；Ortuno等，2002）和生长性能（Lara-Flores等，2002），是鱼类养殖中较好的免疫增强剂。Li和 Gatlin（2003）证实了直溶性啤酒酵母能够提高杂交条纹鲈的免疫机能和对链球菌攻毒时的抵抗力。益生素是含有直溶性酵母、乳成分等发酵产品。

本试验旨在探讨不同剂量的益生素对罗非鱼生长性能、免疫力和抗嗜水气单胞菌攻毒的影响。

1 材料和方法

1.1 试验设计与饲料

5个试验组饲料等能（约16.8 kJ/g饲料），但不等氮（粗蛋白为29%或33%左右）（见表1）。对照1组饲料的粗蛋白含量约33%，对照2和3个试验组饲料粗蛋白含量大约是29%。益生素（百泰A）由美国国际原料公司（St.Louis,MO,USA）提供。益生素（百泰A）分别按照0.4%、0.8%和1.2%的水平补充到对照2组的日粮中等量代替纤维素组成GA4、GA8、GA12三个试验组日粮。

饲料原料经粉碎后制成2.4 mm粒径的颗粒饲料，然后把这些颗粒在室温下烘干，置冰箱保存备用。

表1 日粮组成及营养水平

1.2 试验鱼及养殖条件

试验在西南大学荣昌校区水产系实验室进行。选用当年人工孵化的同一批鱼，平均体重为（17.25±1.25）g。正式试验前，罗非鱼先置于2个池塘网箱中暂养，并分别以对照组1和2的饲料饱食投喂，使之逐渐适应试验饲料。暂养2周后，挑选出体格健壮、规格一致的试验鱼随机分为5组，分别投喂5种试验饲料驯养。

每天早、中、晚投喂3次至饱食，投喂结束后30 min吸出池内残饵及粪便。试验共进行56 d，试验期间水温（25.0±1.0）℃、pH 值（7.5±0.5）、溶氧量≥5 mg/l、氨氮浓度＜0.2 mg/l、余氯浓度＜0.1 mg/l。

1.3 检测指标及分析方法

1.3.1 生长速度

以鲜重的罗非鱼体重变化、增重率和特定生长率等表示生长速度。增重率(%)=(Wt-W0)/W0×100；特定生长率(%/d)=[(LnWt-LnW0)/d]×100，W0和 Wt分别表示养殖开始和结束时的罗非鱼体重（g）。

1.3.2 饲料利用效率

以饲料系数和蛋白效率表示，饲料系数=投喂饲料量/鱼体增重量；蛋白效率=(Wt-W0)/F×P%，F指饲料消耗量，P%指饲料蛋白质含量。

1.3.3 肌肉营养成分测定

试验结束每处理组取12尾鱼，取其背部肌肉进行肌肉营养成分分析。鱼体肌肉常规成分分析均用AOAC方法。其中水分采用105℃烘箱干燥恒重法；粗蛋白质采用凯氏定氮法（总氮×6.25）；粗脂肪采用索氏抽提法（以乙醚为抽提液）；粗灰分采用马福炉中灼烧法(550℃)。

1.3.4 形体指标

以肥满度、内脏指数（内脏重与体重比）、肝胰脏指数（肝胰脏重与体重比）等指标对鱼体形态进行评价。其中肥满度=Wt/L3，L指对应体重的鱼体长（cm）。

1.3.5 细菌攻毒

在以上所有测定结束后，从每桶随机取5尾鱼用来监测嗜水气单胞菌攻毒后各处理的非特异性免疫的能力。将鱼麻醉后腹膜内注射0.1 ml磷酸盐缓冲液（PBS），PBS 中含有 4.0×107cfu/ml的嗜水气单胞菌，嗜水气单胞菌是在胰蛋白胨培养基上培养，然后用PBS洗脱。在攻毒期间，攻毒后24 h停饲，然后各组鱼仅投喂对照组饲料，监测死亡率21 d。

1.4 统计分析

试验结果以平均值±标准差表示。所有试验数据均通过SPSS11.5进行单因素方差分析，当有显著差异时，进行Duncan's法多重比较。

2 结果

2.1 生长性能

与对照2组相比，益生素补充后，第4周和第8周罗非鱼的体增重和饲料效率均显著提高 (P＜0.05)，而其中GA8和GA12组与对照1组无显著差异 (P＞0.05)(见表 2)。

表2 益生素的补充对罗非鱼体增重和饲料系数的影响

2.2 肝体指数、脏体指数和肥满度（见表3）

养殖8周后，GA8和GA12组的罗非鱼肥满度比对照2组显著提高(P＜0.05)，而肝体指数则显著降低(P＜0.05)，但均与对照 1 组无显著差异(P＞0.05)。各组间脏体指数无显著差异(见表3)。

表3 益生素的补充对罗非鱼形体指标的影响

2.3 肌肉营养成分分析

各组间罗非鱼肌肉水分、粗蛋白和粗脂肪含量没有显著差异(P＞0.05)(见表4)。GA8和GA12组罗非鱼的肌肉灰分含量与对照2组相比有显著降低（P＜0.05），与对照1组相比无显著差异(P＞0.05)。

表4 益生素的补充对罗非鱼肌肉营养成分的影响（%鲜重）

2.4 嗜水气单胞菌攻毒试验

经过8周的养殖，利用嗜水气单胞菌对罗非鱼进行了攻毒并记录攻毒后21 d内的死亡情况（见图1）。GA12组罗非鱼攻毒后的成活率比各组均显著提高 (P＜0.05)，GA4和GA8组的罗非鱼成活率比对照2显著提高 (P＜0.05)，与对照1相比无显著差异 (P＞0.05)。

3 讨论

益生素已经被证实是对人类和动物有益的物质，最近几年益生素被运用到水产动物中。以前的研究表明，益生素对杂交条纹鲈 (Morone chrysops×M.saxatilis)有较好的促生长和免疫功效 (Li等，2004、2005)。益生素是一种含有部分直溶性酵母、奶制品和酵母发酵代谢产物的混合物，并且含有复杂的碳水化合物，益生素能够提高宿主肠道平衡(Gibson等，1995)，它含有10%乳糖，乳酸菌是一种有益菌，乳糖是它的底物。益生素能够提高肠道有益菌平衡和机体免疫功能，但是是否它能抑制潜在的致病菌，这还没有得到证实。Li等(2004、2005)观察到在杂交条纹鲈饲料中添加1%和2%益生素能够提高鱼体生长性能。

本试验结果表明，第4周和第8周的检测结果发现，补充益生素后，罗非鱼的增重率和饲料效率均显著高于对照2组，与对照1组相比没有显著差异。3个益生素补充组的饲料粗蛋白含量与对照2组相同，均为29%，对照1组为33%。可见，益生素的补充提高了罗非鱼对饲料蛋白的利用效率，使其增重效果和饲料利用效率达到33%蛋白含量的对照组。Li等(2004)以1%或2%益生素为补充日粮作为试验饲料，经过7周的试验，相比用基础日粮饲喂的鱼来说，试验组杂交条纹鲈幼鱼的体增重和饲料转化率明显增加，同时发现益生素的补充还显著增强了对链球菌的抵抗力。

益生素的补充还提高了罗非鱼的肥满度，降低其肝体指数，进一步表明益生素的促生长和保持鱼体健康的功效。同时，益生素的补充对罗非鱼肌肉蛋白和脂肪等主要营养成分的含量没有显著影响。这也与其本身的作用机制相一致。

嗜水气单胞菌攻毒结果表明，1.2%益生素补充组的罗非鱼21 d攻毒后成活率显著高于各试验组，0.4%和0.8%益生素补充组的罗非鱼比对照2组显著提高。可见，益生素的补充，可以显著提高罗非鱼的抗病能力。理论上讲，富含源于酵母的寡糖、核苷酸和其它免疫刺激因子的益生素对罗非鱼抗嗜水气单胞菌攻毒有显著的正面效果，但也有可能是该产品中的其它活性成分发挥了重要作用。

4 结语

综上所述，试验初步认为，饲料中补充1%左右的益生素，对罗非鱼生长有促进作用，提高其对饲料的利用效率，同时增强其对疾病的抵抗能力，与高蛋白饲料的养殖效果无显著差异。

23篇，刊略，需者可函索）