中图分类号：S641.2；X502 文献标志码：A 文章编号：1001-4330（2025）05-1131-08

0 引言

【研究意义】N-糖蛋白在植物细胞器中广为分布，主要包含寡甘露糖N-聚糖（paucimanno-sidicN-glycans）和复杂N-聚糖（complex N-glycans）两类低糖链[1]。糖苷水解酶（glycoside-hydrolase）属于糖蛋白类，在细胞壁结构和功能方面具有重要的作用，主要作用于各种糖昔和寡糖，形成游离N-聚糖Glycans，会直接影响果实细胞壁和细胞膜的化学组成成分，从而破坏细胞壁的完整性，导致番茄果实软化（PriemB，1993）[2]其中β-氨基己糖苷酶（ 是糖苷水解酶家族20（GH20）的成员，属于外切糖苷酶，催化位于N-糖蛋白非还原性末端的N-乙酰氨基葡萄糖降解，使N-糖蛋白携带的复杂N-聚糖变为寡甘露糖N-聚糖，造成游离N-聚糖积累，加速番茄果实成熟软化[3-4]。果实软化裂解主要是酶催化的细胞壁聚合物降解的结果，其中糖苷水解酶 β-D-N-ζ 酰氨基己糖苷酶（ （β-Hex） 在果实成熟期间特异性表达，是糖蛋白糖基化最后阶段的关键酶，对果实的成熟软化发挥着重要作用。【前人研究进展】利用转基因技术在番茄中过表达Slβ-Hex会导致果实过度软化，转入Slβ-Hex的RNAi基因则会抑制SIβ-Hex的表达，可以降低果实的成熟软化速率、延长保质期，N－聚糖加工与果实成熟软化过程有关，为通过突变失活 β-Hex 酶基因的表达，抑制番茄细胞壁水解程度调控番茄果实软化提供了思路[5-8]。【本研究切人点】目前利用CRISPR-Cas系统靶向编辑加工番茄细胞壁糖苷水解酶相关基因改良耐贮性的报道较少。番茄为呼吸跃变型果实，容易过熟软化腐烂，严重影响番茄的种植和加工。把番茄SIβ-Hex的RNAi基因转人番茄，能迟滞果实软化，但转基因插入植物基因组位点存在不确定性，使得该项技术的推广应用受到一定限制[9-10] 。……