冯彩团, 符仕康, 王 宁, 郭殿华

(海南西部中心医院, 1. 消化内科, 2. 肿瘤外科, 3. 消化科内镜室, 海南 儋州, 813099)

胃癌是较常见的恶性肿瘤,因胃癌初期临床症状不具有特异性,大多数患者确诊时已处于胃癌晚期,错过了最佳手术治疗时间,因而常采用化疗、放疗、靶向药物等方式进行治疗[1-2]。幽门螺杆菌(Hp)感染会诱发胃部炎症性疾病,破坏胃黏膜组织,进而诱导胃癌等恶性肿瘤疾病的发生[3-4]。微小RNAs(miRNAs)是一种广泛存在的非编码RNA, 能够参与多种肿瘤信号的传导通路,在不同癌症中发挥作用[5]。微小RNA-506(miR-506)是miRNAs家族的重要成员之一,研究[6-7]表明miR-506在恶性肿瘤的形成、侵袭和迁移等过程中发挥重要作用。微小RNA-874(miR-874)同样作为miRNAs家族的一员,与多种类型肿瘤的发生和发展密切相关,研究[8]表明miR-874能够发挥抑制胃癌细胞生长、迁移及侵袭能力的作用。本研究探讨胃癌患者血清miR-506和miR-874的表达水平,分析两者与Hp感染及病情严重程度的相关性,现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年5月—2022年5月海南西部中心医院收治的78例胃癌患者为研究对象,年龄50～70岁,平均(60.36±6.42)岁。纳入标准: ① 通过胃镜取活组织并行病理学检查,按照《中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见(2014年,长沙)》[9]相关标准诊断为胃癌者; ② 术前进行呼气实验诊断Hp感染者; ③ 既往无放、化疗史者; ④ 患者均未接受抗Hp治疗; ⑤ 近2个月内未服用相关治疗药物者; ⑥ 患者及家属知晓且同意参与该研究,并签署知情同意书。排除标准: ① 合并其他恶性肿瘤者; ② 近期有服用抗炎药物史者; ③ 合并免疫系统疾病者; ④ 合并心、肝、肾等重要脏器功能障碍者。根据Hp感染情况将患者分为感染组43例和未感染组35例; 根据TNM分期将患者分为Ⅰ～Ⅱ期40例和Ⅲ～Ⅳ期38例。本研究经医院伦理委员会批准实施。

1.2 研究方法

1.2.1 Hp感染的检测: 所有患者均行14C-尿素呼气试验[10]。患者空腹5 h后,口服1粒14C胶囊,等待25 min后进行呼气试验,收集患者呼出气体,采用Hp检测仪(型号为FR-9101, 购自武汉科尔达医疗技术有限公司)测定14C含量,测量结果>100 dpm/mmol CO2为阳性。

1.2.2 血清miR-506和miR-874表达水平检测: 采集患者晨起空腹外周静脉血3 mL, 以5 000 r/min离心10 min, 取上层血清置入EP管中,置于-20 ℃冰箱中备用。采用RNA提取试剂盒(货号为9112, Takara公司)从血清中提取总RNA, 采用分光光度计(UPT-100, 上海尤尼柯仪器有限公司)测量OD260/280, 取2 μg总RNA经DNA酶处理后按照说明书操作得到cDNA, 使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(货号为Q711-02, Takara公司)对目的基因miR-506、miR-874进行扩增,仪器为7300型实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司),以U6为内参,进行数据分析,采用2-△△Ct法计算miR-506和miR-874的表达水平,引物序列见表1。

表1 引物序列

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 感染组与未感染组患者血清miR-506和miR-874表达水平比较

感染组患者血清miR-506水平为(1.41±0.33), 高于未感染组的(1.20±0.28), 差异有统计学意义(t=2.98,P<0.05); 感染组患者血清miR-874表达水平为(1.22±0.27), 低于未感染组的(1.50±0.51), 差异有统计学意义(t=3.108,P<0.05)。

2.2 不同病情严重程度患者血清miR-506、miR-874、PG Ⅰ和G-17表达水平

Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-506和G-17水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者, miR-874和PG Ⅰ表达水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05), 见表2。

表2 不同病情严重程度患者血清miR-506和miR-874表达水平比较

2.3 血清miR-506与miR-874表达水平的相关性分析

对胃癌患者血清miR-506与miR-874表达水平进行相关性分析,结果显示,血清miR-506与miR-874表达水平呈显著负相关(r=-0.886,P<0.05)。

2.4 胃癌患者病情严重程度与临床病理特征的关系

年龄、性别、肿瘤直径、分化程度与病情严重程度均无相关性(P>0.05), Ⅲ～Ⅳ期患者发生淋巴结转移的比率高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 胃癌病情严重程度与患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.5 胃癌患者病情严重程度影响因素的多因素Logistic回归分析

以病情严重程度为因变量(Ⅲ～Ⅳ期=1, Ⅰ～Ⅱ期=0), 以miR-506(连续变量)、miR-874(连续变量)为自变量,进行Logistic回归分析,结果显示, miR-506、miR-874为病情严重程度的影响因素(P<0.05), 见表4。

表4 多因素Logistic回归分析影响胃癌患者病情严重程度的相关因素

2.6 血清miR-506和miR-874对Hp感染及病情严重程度的诊断价值分析

ROC曲线分析结果显示,血清miR-506、miR-874以及两者联合检测诊断Hp感染的AUC分别为0.741、0.648、0.823, 两者联合检测优于血清miR-506和miR-874各自单独检测(P=0.007、0.001); 血清miR-506、miR-874以及两者联合检测诊断病情严重程度的AUC分别为0.697、0.797、0.836, 两者联合检测优于血清miR-506和miR-874各自单独检测(P=0.045、0.046)。由此可见,血清miR-506与miR-874联合检测具有较高的特异性,对胃癌患者的病情严重程度具有较高的诊断价值,见图1。

3 讨 论

胃癌是位于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,其发病率及致死率分别高达42.6%和45.0%。由于疾病初期出现腹胀、消化不良等症状,胃癌常被当作普通胃病进行治疗,易错过最佳手术治疗时机,治疗效果及预后状态不佳,影响患者的生命健康及质量[11-14]。

研究[15-16]表明胃腔及胃黏膜中存在双歧杆菌、乳酸杆菌、幽门螺杆菌等大量微生物群,这些菌群与胃炎、胃萎缩等胃病的发生密切相关。Hp与胃癌的发生紧密相关,其主要是通过参与胃黏膜组织中异常细胞的信号传导过程来促使胃黏膜细胞发生癌变,形成恶性肿瘤。miR-506是miRNAs家族重要成员之一,其能够通过多种信号传导及调控通路参与并影响肿瘤的形成、侵袭和迁移等过程,在不同类型癌症中发挥作用。ROSTAMI YASUJ S等[17]研究显示, miR-506高表达会导致癌细胞增多。本研究中, Hp感染组患者血清miR-506水平高于未感染组, Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-506水平也显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,与周俊平[18]研究发现的非小细胞肺癌组织中miR-506表达水平高于癌旁组织以及赵德余等[19]研究发现的结肠癌组织标本中miR-506表达水平显著高于癌旁组织的结果均一致,初步提示miR-506与Hp感染的发生及病情严重程度密切相关。

miR-874也与胃癌的发生和发展密切相关。JIANG B F等[20]表示, miR-874的表达在胃癌的发展中起到抑制作用,并且miR-874的表达不仅会影响胃癌细胞血管拟态的形成,还会影响癌细胞的转移能力[8]。本研究中,感染组患者血清miR-874表达水平显著低于未感染组,Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-874表达水平显著低于Ⅰ～Ⅱ期患者,与ZHANG X Y等[21]研究发现miR-874在胃癌细胞中呈低表达且在胃癌组织中的表达显著低于癌旁组织的结果一致,表明miR-874高表达会抑制Hp感染发生,减缓病情恶化程度。相关性分析显示,胃癌患者血清miR-506与miR-874表达水平呈负相关,说明miR-874与miR-506对Hp感染及病情严重程度起到相反的作用,这与感染组患者以及不同病情严重程度患者血清中两者表达趋势相反的结果一致。本研究单因素及多因素Logistic回归分析结果显示, miR-506、miR-874是病情严重程度的影响因素; ROC曲线显示,血清miR-506和miR-874联合检测诊断Hp感染的AUC为0.823, 大于各自单独检测,血清miR-506和miR-874联合检测诊断病情严重程度的AUC为0.836, 两者联合检测对Hp感染及病情严重程度具有较好的诊断价值。

综上所述,血清miR-506、miR-874表达水平与Hp感染的发生及病情严重程度有关,两者联合检测对Hp感染及病情严重程度具有一定的辅助诊断价值。