许海，魏民，杨德福，张恒柱

1 扬州大学附属江都人民医院神经外科，江苏扬州 225202；2 扬州大学附属苏北人民医院神经外科

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，具有高复发率、高致残率、高病死率等特征。在我国脑胶质瘤的年发病率为5/10 万～8/10 万，5 年病死率仅次于肺癌和胰腺癌［1-2］。但目前脑胶质瘤发病的分子机制尚不完全清楚。研究表明，长链非编码RNA（lncRNA）虽然不具有蛋白编码功能，但其异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关［3］。乳腺癌抗雌激素耐药基因4（BCAR4）是近年发现的一种lncRNA。有研究报道，lncRNA BCAR4异常表达与脑胶质瘤的恶性进展有关［4］。基质金属蛋白酶7（MMP-7）是一种分泌型蛋白，能够通过蛋白水解作用促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等［5］。郭秀莲等［6］研究报道，上调MMP-7表达可促进脑胶质瘤细胞增殖和侵袭并抑制其凋亡。但目前lncRNA BCAR4、MMP-7表达与脑胶质瘤患者临床病理特征和预后的关系尚不完全清楚。鉴于此，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2018 年2 月—2020 年8 月扬州大学附属江都人民医院神经外科收治的脑胶质瘤患者98例。纳入标准：①经术后组织病理检查明确诊断为脑胶质瘤；②初诊，入院前未接受任何抗肿瘤治疗；③接受脑胶质瘤次全切除术或全切除术；④临床病理资料和术后随访资料完整。排除标准：①脑转移瘤者；②合并颅内其他疾病者；③合并其他部位恶性肿瘤者；④合并急慢性感染者；⑤合并免疫或血液系统损害者；⑥年龄＜18 岁者。其中，男55 例、女43例，年龄23～82（60.54 ± 8.54）岁，肿瘤位置：额部41 例、颞部57 例，肿瘤最大径：＜3 cm 48 例、≥3 cm 50 例，组织分化程度：低分化37 例、中高分化61例；WHO 分级［7］：Ⅰ级22 例、Ⅱ级34 例、Ⅲ级26例、Ⅳ级16 例。本研究经扬州大学附属江都人民医院伦理委员会批准（审批编号：2017 伦字1223），所有研究对象或其家属知情同意并签署书面知情同意书。

1.2 lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 表达检测 取术中切除的新鲜脑胶质瘤组织及其配对的瘤旁组织（经术后组织病理检查明确为正常组织），液氮下速冻后研磨成粉末。采用TRIzol 法提取组织总RNA，经紫外可见分光光度计鉴定，OD260/OD280为1.8～2.0。按TaKaRa RNA PCR Kit 说明将总RNA 逆转录合成为cDNA。逆转录条件：37 ℃ 1 h，80 ℃ 5 s。以cDNA 为模板，按SYBR®Premix Ex TaqTM试剂盒说明进行PCR 扩增。引物序列由上海剑钝生物科技有限公司设计合成。lncRNA BCAR4 上游引物5'-GCCACAGGAGCTAGAGCAGT-3'、下游引物5'-GCAGAGTATTCAGGGTAAGGGT-3'，MMP-7 上游引物5'-GAAGGGCCGAAGAGCTCAAT-3'、下游引物5'-GGCTCGCAAAGTGTCTGTTG-3'，GAPDH 上游引物5'-AACGGATTTGGTCGTATTGGG-3'、下游引物5'-CGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3'。PCR 反应体系共20 µL：cDNA 模板1 µL，2 × Hieff®PCR Master 8 µL，上下游引物各0.5 µL，SYBR Premix Ex Taq 5 µL，RNase-free ddH2O 5 µL；反应条件：95 ℃ 90 s，95 ℃ 30 s、63 ℃ 30 s、72 ℃ 15 s 共40 个循环。PCR扩增反应结束，绘制熔解曲线，获取循环阈值（CT）数。以GAPDH 为内参，采用2-ΔΔCT法计算lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA相对表达量。

1.3 随访 脑胶质瘤患者出院后通过电话或门诊复查形式定期随访3年，第1年每3个月随访1次，之后每半年随访1次。随访截至2023年8月31日，终点事件为患者死亡或至随访截至日期，统计患者生存时间。以脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA相对表达量的均值为临界值，将患者分为lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 高表达者与低表达者，分析脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达与患者预后的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS28.0 统计软件。符合正态分布的计量资料以±s表示，结果比较采用独立样本t检验。计数资料比较采用χ2检验。相关性分析采用Pearson 相关分析法。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。危险因素分析采用多因素Cox 回归模型。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑胶质瘤组织与瘤旁正常组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 表达比较 脑胶质瘤组织与瘤旁正常组织lncRNA BCAR4 相对表达量分别为2.42± 0.67、1.13 ± 0.22，MMP-7 mRNA 相对表达量分别为1.00 ± 0.17、0.54 ± 0.10。脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 相对表达量均高于瘤旁正常组织（t分别为18.094、22.594，P均＜0.01）。

2.2 脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达的关系 Pearson 相关分析显示，脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4 相对表达量与MMP-7 mRNA 相对表达量呈正相关关系（r=0.810，P＜0.01）。

2.3 脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达与临床病理特征的关系 见表1。

表1 脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达与临床病理特征的关系

2.4 脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA表达与患者预后的关系 随访3年，98例脑胶质瘤患者失访4例、死亡45例，3年生存率为54.08%，平均生存时间为26.596 个月。lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA高表达者分别有48、51例，其低表达者分别有50、47例。lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA高表达者平均生存时间分别为22.047、22.234个月，其低表达者分别为30.148、30.609个月。lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 高表达者平均生存时间均低于其低表达者（Log-rankχ2分别为11.357、11.666，P均＜0.01）。

2.5 脑胶质瘤患者死亡的危险因素 脑胶质瘤患者死亡者与存活者临床资料比较见表2。以年龄（＜60 岁=0，≥60 岁=1）、组织分化程度（中高分化=0，低分化=1）、WHO 分级（Ⅰ、Ⅱ级=0，Ⅲ、Ⅳ级=1）、lncRNA BCAR4 表达（原值录入）、MMP-7 mRNA 表达（原值录入）为自变量，以随访时间为时间变量，以生存状态（存活=0，死亡=1）为因变量，纳入多因素Cox 回归模型。结果显示，组织分化程度低分化和WHO 分级Ⅲ、Ⅳ级以及lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 表达升高为脑胶质瘤患者死亡的独立危险因素（P均＜0.05），见表3。

表2 脑胶质瘤患者死亡者与存活者临床资料比较［例（%）］

表3 脑胶质瘤患者死亡的多因素Cox回归分析结果

3 讨论

脑胶质瘤是起源于神经胶质细胞的颅内恶性肿瘤，以颅内压增高、神经功能障碍和癫痫发作为主要临床表现。迄今为止，脑胶质瘤的病因尚不完全清楚，可能与高外显率基因遗传突变、高剂量电离辐射、细菌或病毒感染等因素有关［1］。近年来，尽管以外科手术、放疗、化疗为主的综合治疗取得了一定进步，但由于脑胶质瘤细胞具有高度增殖和侵袭特征，很难达到根治效果，并且复发率较高，预后仍然较差，尤其是WHO 分级Ⅲ、Ⅳ级患者［8］。目前，脑胶质瘤发病的分子机制尚不完全清楚。因此，深入探索脑胶质瘤发病的分子机制，对寻找肿瘤特异性治疗靶点至关重要［9］。

表观遗传学在肿瘤的发生、发展中具有重要作用。lncRNA 作为新兴的表观遗传调控因子，能够通过直接或间接调控靶基因的表达，促进肿瘤的发生、发展［3］。lncRNA BCAR4定位于人染色体16p13.13，最初于乳腺癌抗雌激素耐药基因筛查时被发现，后进一步研究证实其与乳腺癌细胞的恶性生物学行为有关［10］。近年研究发现，lncRNA BCAR4 还可在其他恶性肿瘤中发挥致癌作用，如lncRNA BCAR4 能够靶向miR-181c-5p 上调LIM 和SH3 蛋白1，从而促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移［11］；lncRNA BCAR4还能靶向大肿瘤抑制激酶2促进肝细胞癌细胞的增殖、迁移并抑制其凋亡［12］。但目前lncRNA BCAR4 与脑胶质瘤的关系尚不完全清楚。本研究结果显示，脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4 表达上调，并且其表达变化与组织分化程度和WHO 分级有关。结果表明，lncRNA BCAR4 高表达能够参与脑胶质瘤的发生、发展。究其原因，lncRNA BCAR4 表达上调可激活胶质瘤相关癌基因同源蛋白2，而胶质瘤相关癌基因同源蛋白2是脑胶质瘤的重要致癌基因，其表达上调能够促进脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移［13］。

细胞外基质是细胞微环境的核心组分，可为细胞提供结构和机械支持，能够参与细胞增殖、分化、迁移、侵袭等生物学过程。细胞外基质的降解则会破坏细胞结构导致癌变，同时变薄的细胞基底膜还会促进肿瘤细胞的侵袭和迁移［14］。MMP-7 是MMPs家族中最小的成员，其激活后可降解细胞外基质和基底膜，从而参与肿瘤的发生、发展。MMP-7 还能切割多配体蛋白聚糖-1-白细胞介素8复合物介导炎症反应，从而促进肿瘤的侵袭和转移［15］。例如，MMP-7 能够通过降解细胞外基质促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移［16］；MMP-7 还能通过蛋白激酶B/核因子κB 信号通路介导炎症反应，从而促进前列腺癌细胞的侵袭和迁移［17］。本研究结果显示，脑胶质瘤组织MMP-7 mRNA 表达上调，并且其表达变化与组织分化程度和WHO 分级有关。结果表明，MMP-7 高表达能够参与脑胶质瘤的发生、发展，与既往研究［6］报道一致。究其原因，MMP-7 高表达能够加速细胞外基质破坏和增强炎症反应，从而促进脑胶质瘤的恶性进展［18］。

本研究Pearson 相关分析显示，脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4 相对表达量与MMP-7 mRNA 相对表达量呈正相关关系，提示lncRNA BCAR4 与MMP-7可能共同参与脑胶质瘤的发生、发展。最近WANG等［4］研究亦证实，lncRNA BCAR4能够靶向miR-2276上调MMP-7 表达，促进脑胶质瘤细胞的增殖和侵袭，进一步佐证了本研究结论。本研究结果还显示，lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 高表达者平均生存时间均低于其低表达者，并且lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 表达升高为脑胶质瘤患者死亡的独立危险因素。结果提示，lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 高表达与脑胶质瘤患者预后不良密切相关，有可能成为脑胶质瘤患者预后的潜在预测指标。

综上所述，脑胶质瘤组织lncRNA BCAR4、MMP-7 mRNA 表达显著升高，二者表达变化与组织分化程度、WHO分级和预后密切相关。