洪 波 马燕强 刘益钱

(杭州市种猪试验场，浙江杭州 311115）

猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染猪而引起的一种急性传染性疾病，是危害生猪健康养殖的重要疫病之一[1,2]。PRV 属于疱疹病毒科（Herpesviridae）α-疱疹病毒亚科，毒力是由几种基因协同调控，主要有胸苷激酶（TK）基因、gE、gD、gI 基因等调控，缺失一种或几种毒力基因，可使伪狂犬病毒的毒力下降，但仍保持免疫原性[3]，这使得伪狂犬病基因工程苗对该病的预防发挥了非常重要的作用，同时伪狂犬病病毒基因缺失蛋白抗体的ELISA 检测方法可以准确区分免疫抗体和野毒感染抗体，这为猪场伪狂犬病的净化提供了理论基础[4]。

浙江省杭州市某二元种猪场有长白母猪487 头，公猪12 头，为了进一步提高种猪质量和生产成绩，利用近3年时间对公猪、母猪、哺乳猪、保育猪、生长猪、后备种猪实施采血检测、隔离淘汰、调整免疫程序等技术，同时严控生物安全体系，完成了对该场猪伪狂犬病的净化任务。

1 试验材料

1.1 主要试剂

PRV-gE 抗体检测试剂盒、PRV-gB 抗体检测试剂盒均购自IDEXX 公司。血清样品的检测步骤和结果判定均严格按照试剂盒说明书。

1.2 临床样品

浙江省杭州市某二元种猪场血清。

1.3 疫苗

猪伪狂犬病病毒gE 缺失活疫苗（Bartha-k61 株），生产厂商为美国硕腾。

2 试验结果与分析

全猪场实行闭群管理、自繁自养，不从场外引种，准备了1 栋600 m2的后备猪舍。

2.1 猪场伪狂犬病的流行调查与调整

由表1 可知，PRV-gE 抗体检测结果表明，猪场所有的猪均有PRV 感染，但感染率不高，都在10.0%以内；根据检测结果，猪场应立即淘汰PRV-gE 抗体阳性的种公猪、种母猪、后备种猪及后备种猪同栏猪。PRV-gB 抗体检测结果表明，种公猪、种母猪、哺乳前期、保育中后期阳性率高，保护力合格；哺乳后期、保育前期、生长猪、后备种猪gB 抗体阳性率低，保护力不合格。经分析，该猪场哺乳后期和保育前期猪的PRV-gB 阳性率低的主要原因是母源抗体下降；生长猪和后备猪的保护力不够的主要原因是免疫抗体的消长规律。随即调整了伪狂犬病的免疫程序（见表2）。

表1 2020年3月份对猪场PRV 感染和疫苗的免疫效果进行调查

表2 调整前后的猪伪狂犬疫苗免疫程序

由表2 可看出，免疫程序调整后，增加了仔猪初生后的滴鼻免疫，并且在保育和后备猪阶段各增加了1 次免疫。从2020年4月份开始执行调整后的免疫程序，执行5 个月后，再次进行PRV 的净化检测。

2.2 猪场伪狂犬病感染阳性猪清除

2020年9月对实施净化PRV 的猪群进行PRV-gB阳性率检测，发现在哺乳后期、保育前期、生长猪、后备种猪阶段PRV-gB 阳性率有了大幅度上升，且都超过了90.0%，说明调整后的免疫程序是可行的。PRV-gE检测结果显示，除了种公猪，每个阶段的猪都有不同程度的野毒感染，说明仅调整免疫程序达不到净化PRV 的目的。经分析，淘汰PRV-gE 阳性种母猪、后备种猪及后备种猪同栏猪。同时，认为猪场各猪只间存在水平交叉感染，需要加强猪场的生产管理。如加大种群淘汰力度，确保净化顺利进行；加强后备猪的监测，确保PRV-gE 100%阴性；严格实行“全进全出”，进出猪只前后，对栏舍彻底清洗消毒；及时从正常猪中挑出病猪并进行隔离治疗，死猪及时进行无害化处理；加强猪场人员、物品和环境消毒，人员进入猪舍换衣换鞋；加强猪只日常保健。此后，免疫程序保持不变，继续执行PRV 的净化，6月后猪场已出售大部分潜在带毒猪只，并再次实施PRV 感染阳性猪清除。至2021年4月，再对猪群进行PRV 抗体检测，发现各阶段猪只PRV-gE抗体阳性率均为0，说明PRV 阳性初步清除成功，猪只间的水平传播得到有效控制。各阶段猪只PRV-gB 抗体阳性率也有了提高，免疫合格率在95%以上，说明疫苗免疫效果优秀。

2.3 猪场伪狂犬病的感染评估与净化维持

2021年5-12月，对猪场开展1 个猪生长周期的抽样日常检测，从而来评估猪场PRV 的感染情况。针对种公猪分别于5、7、9、11月份每月抽检2 次，每次抽检比例25%；种母猪群6、8、10、12月份每月抽检8次，每次抽检比例6.25%；哺乳仔猪、保育猪、生长猪每间隔1 个月抽检1 次，后备种猪群每月分4 次抽检，每次抽检比例6.25%。监测结果发现，抽检全部猪群中PRV-gE 抗体阳性率均为0，整体猪群无野毒感染。PRV-gB 抗体阳性率也维持在95%以上，猪场免疫效果维持优秀。表明该猪场PRV 净化有效可行，达到预期效果。

2022年2月至2023年1月，对达到PRV 净化标准的猪群持续进行抽样监测，发现各猪只没有PRV 野毒感染。表明猪场PRV 已经清除干净，净化成功。

3 小结

2011年以来，猪伪狂犬病的流行在全国范围内呈上升趋势，目前已成为严重危害养猪业的疫病之一[5,6]。2018年非洲猪瘟在我国发生以来，猪场都增强了生物安全防控措施，也配备了检测实验室，这为猪伪狂犬病、猪蓝耳病等的净化提供了条件[7-9]。庞超等[10]、吕素芳等[11]研究发现猪伪狂犬的毒力因子是gE 基因，我国实际生猪养殖过程中多采用PRV-gE 基因缺失疫苗预防猪伪狂犬病。本次猪场均采用PRV-gE 基因缺失疫苗，正常免疫猪体内不会出现gE 抗体，只有感染伪狂犬野毒的才会出现gE 抗体，因此，gB 抗体检测试剂盒联合gE 抗体检测试剂盒，能够区分疫苗免疫抗体和野毒抗体[12,13]。此外，张志梅[14]、方伟等[15]研究表明，即使猪场免疫了PRV-gE 缺失疫苗，不同场的PRV 感染情况也有极大的差异，这与免疫疫苗是否高效，以及免疫是否科学合理有一定关系，所以在此次猪场猪伪狂犬病的净化过程中，根据第1 次调查结果果断修改了PRV 的免疫程序。在此次净化案例中可以得出，PRV 感染阳性场，在有效使用PRV-gE 缺失疫苗的情况下，持续通过免疫-检测-淘汰-监测，仍然可以有效净化PRV。