刘爽, 郭冉, 苏新云, 杨文平, 周玉法

(山东第一医科大学附属济南人民医院 呼吸内科, 济南 271100)

肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤, 其中肺腺癌是肺癌中的主要亚型, 患者总生存率较低[1-2]。研究发现, miRNA在机体中广泛表达, 其异常表达参与了肿瘤细胞生长、分化、转移和凋亡等多种生物学行为[3]。miR-30b-5p是miR-30b家族成员, 在肿瘤中发挥抑癌或促癌作用[4]。然而, miR-30b-5p的作用是错综复杂的, 甚至是有争议的。如miR-30b-5p可以作为抑癌基因, 抑制肝癌细胞增殖和细胞周期[5], 但在髓母细胞瘤和恶性间皮瘤中充当癌基因[6-7]。这些研究表明, miR-30b-5p可能在不同的肿瘤中发挥不同的作用。另有研究结果显示, miR-30b-5p在肺癌中发挥抑癌作用, 并能靶向LRP8使肺癌细胞对顺铂重新敏感[8]。淋巴样特异性解旋酶(helicase lymphoid-specific, HELLS)是一种SWI2/SNF2染色质重塑酶。研究显示,HELLS是miR-451a靶基因, 在肺癌中高表达, miR-451a可以通过直接沉默HELLS激活凋亡信号通路[9]。但关于miR-30b-5p在肺腺癌中的作用及其分子机制尚存在争议, 有待分析。为此, 本研究将分析miR-30b-5p和HELLS在肺腺癌中表达及二者之间的靶向关系, 以探讨miR-30b-5p是否能通过靶向负调控HELLS影响肺腺癌细胞的增殖, 旨在为肺腺癌的治疗提供药物靶点和生物标志物。

1 材料与方法

1.1 材料A549、Calu-3细胞购自ATCC; SPF级BALB/c 4～6周龄雄性裸鼠16只, 体质量15～20 g, 购自山东大学实验动物中心。DMEM培养液、FBS、青链霉素、胰蛋白酶购自Gibco公司; LipofectamineTM2000试剂盒、TRIzol试剂、RNA反转录试剂盒和PCR试剂盒购自Invitrogen公司; PCR引物、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid, BCA)蛋白检测试剂盒购自生工生物工程(上海)有限公司; CCK-8试剂购自Sigma公司; 结晶紫染液购……