王 迪,杨圆圆,王 鑫,赵 健,韩增鑫,周忠光

(1.黑龙江中医药大学附属第二医院,黑龙江 哈尔滨 150060;2.北京中医药大学东直门医院,北京 100700;3.黑龙江中医药大学附属第四医院,黑龙江 哈尔滨 150010;4.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)

学习记忆障碍是阿尔茨海默症和轻度认知功能障碍的前驱表现,早期干预纠正能够有效地预防或减缓相关疾病的发生和发展。针刺作为中医学传统的治疗手段在改善记忆方面具有一定的临床疗效。研究显示,长期高脂饮食会导致学习记忆能力下降,同时也会引起肠道菌群的变化[1]。肠道菌群紊乱会导致其产生的神经递质、细胞因子与激素等物质发生改变,从而通过微生物-肠-脑轴作用于中枢神经系统,导致相关疾病的发生与发展。本研究采用高脂饮食诱导学习记忆障碍,利用非标(Label-free)蛋白质组定量技术筛选差异蛋白,探究针刺改善学习记忆能力的作用靶点及可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选取30只SPF级SD大鼠,月龄为10周龄,性别为雄性,体质量为(290.83±10.21)g,大鼠由黑龙江中医药大学动物中心提供。适应性喂养1周后进行学习记忆障碍模型制备。饲养条件为自然光照,温度为(25±2)℃,湿度为(55±5)%,大鼠可自由进食水。本实验严格按照《关于善待实验动物的指导性意见》执行。

1.2 实验试剂及器材

1.2.1 试剂 戊二醛固定液(2.5%)(北京雷根生物技术有限公司);蛋白酶抑制剂Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ与Ⅳ(Merck Millipore);胰蛋白酶(Promega);磷酸化酶抑制剂(Millipore);碘乙酰胺(Sigma-Aldrich);甲酸(Fluka);尿素(Sigma-Aldrich);二硫苏糖醇(Sigma-Aldrich);乙腈(ThermoFisher Scientific);三氟乙酸(Sigma-Aldrich);BCA试剂盒(碧云天生物技术);2-D Quant试剂盒(GE Healthcare);丙酮(杭州汉诺化工);十二烷基硫酸钠(Amresco)。……