杨华军 何仕琼 李小平 林江 杜飞 简悦

(1遵义市第一人民医院(遵义医科大学第三附属医院)呼吸与危重症医学科,贵州 遵义 563002;2兴义市人民医院(贵州医科大学附属兴义医院))

肺癌是起源于肺实质或气道的恶性肿瘤,是癌症死亡的首要原因〔1〕。因早期诊断困难,大多数患者出现疑似肺癌的症状或偶然发现胸部影像学异常而进行诊断性评估,确诊时已丧失最佳治疗机会,预后较差。肺癌转移是病情恶化的主要原因,但转移及扩散的分子机制尚不明确。研究表明,miRNA参与肿瘤的发生、发展及分化,在肿瘤的增殖和转移中发挥重要作用〔2〕。miR-195-5p在甲状腺癌中具有调节细胞增殖、凋亡和侵袭的作用〔3〕,在骨肉瘤中,环状RNA Circ001422通过miR-195-5p/成纤维细胞生长因子(FGF)2/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)轴导致病情恶化〔4〕。妊娠相关血清蛋白(PAPP)A与细胞生长、分化密切相关,并参与肿瘤形成。靶基因预测其可能是miR-195-5p的靶基因,但miR-195-5p与PAPPA在肺癌中的研究还未见报道,本研究探讨miR-195-5p靶向PAPPA对肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。

1 材料与方法

1.1材料 人肺腺癌细胞A549、人支气管黏膜上皮细胞BEAS-2B(中国科学院上海细胞库);Lipo-fectamine 3000(美国Invitrogen公司);miR-NC、miR-195-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-195-5p(上海生工生物工程有限公司);si-NC、si-PAPPA(美国San-ta Cruz公司);对照质粒(pcDNA)、过表达质粒(pcDNA-PAPPA)、野生型(WT)及突变型(MUT)PAPPA基因3′UTR荧光素酶表达载体(上海汉恒生物科技有限公司);实时荧光量定-聚合酶链反应(qRT-PCR)、SYBR Green荧光染料试剂盒(大连TaKaRa公司);胎牛血清、RPMI1640培养基(泰思腾生物技术有限公司);CCK-8试剂盒、PAPPA抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG二抗、二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度检测试剂盒(武汉三鹰生物技术有限公司)。……