陈小林 高天慧 李玉泽 张东东 黄文丽 姜祎 曹林林 王薇 宋小妹

(1.陕西中医药大学,陕西 咸阳 712046;2.陕西中医药大学制药厂,陕西 咸阳 712083)

芪珠升白口服液是陕西中医药大学附属医院在长期的临床实践基础上,结合民间使用经验,得出的一种用于放化疗致白细胞减少的复方中药制剂,由黄芪、女贞子、珠子参、当归、灵芝、甘草组成[1-2]。黄芪为上品,是常见的补品之一,具有提高免疫力、抗肿瘤等作用[3-5];女贞子性平、味微苦,无毒,补中固五脏,养神消疾,可调节人体自身的免疫功能[6-7];珠子参微寒,温、平,味苦甘,补肺养阴,祛瘀止痛,止血[8];当归其性温,味甘、辛,为“补血之要药”,具有补血活血、调经止痛的功能,用于血虚萎黄、月经不调之证[9];灵芝甘平,安神补虚,祛痰止咳,无毒,具有提高机体免疫能力、保护肝脏、降低血糖、改善人体睡眠等作用[10];甘草甘平,补脾益气、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药,用于脾胃虚弱、中气不足,解药毒[11-12]。其具有升高白细胞、提高机体免疫能力、加强化疗药物的细胞敏感性及降低肿瘤放化疗带来的不良反应等作用[13]。

近年来,中药毒性与安全性评价受到了广泛的关注[14-15]。本实验所用的芪珠升白口服液经前期实验证明具有升高白细胞、提高免疫力等作用,但其毒性与安全性未作出评价,因此临床用药安全需进一步验证。本试验对该复方制剂采用大鼠进行了长期毒性试验研究,对大鼠的体重、血常规、血液生化指标、脏器指数的分析,全方位地评价其服用的安全性,为科学、合理应用此药提供合理依据。

1 仪器与材料

1.1仪器 800TS型吸收光酶标仪(美国BioTek公司),Heraeus Fresco 21型高速冷冻离心机(美国Thermo Fisher公司),Bayer Advia 2120型全自动血球分析仪(美国拜耳公司)

1.2试药 黄芪、珠子参、女贞子、当归、灵芝、甘草饮片均购自陕西兴盛德药业有限责任公司,经检验均符合陕西省中药饮片标准。蛋白定量测定试剂盒(批号20221103)、谷丙转氨酶测试盒(批号20221101)、谷草转氨酶测试盒(批号20221101)、肌酐测定试剂盒(批号20221031)、总胆固醇测试盒(批号20221101)、白蛋白测定试剂盒(批号20221215),以上试剂均购于南京建成生物科技有限公司。

1.3实验动物 SD大鼠,155～235 g,雌雄各半,购自成都达硕实验动物有限公司,许可证号:SCXK(川)2020-030。

2 方法与结果

2.1动物处理 取SD大鼠,实验前观察1 w,然后选出80只健康大鼠,随机分为4组,即对照组(予生理盐水),高、中、低剂量组,每组雌雄各10只,雌雄分开饲养,每笼5只,定时给予饲料,自由饮水[16]。根据前期课题组药效学研究,设计高、中、低剂量组分别为生药量26 g·kg-1、13 g·kg-1和6.5 g·kg-1,分别相当于临床剂量的30倍、15倍、7.5倍;给药体积为2 g·mL-1,采用灌胃给药的方法,连续给药60 d。

2.2检测指标[17-21]每周称重1次,并根据体重变化调整给药量,给药后观察记录动物的饮食、粪便、行为等一般状态,发现死亡动物及时分析死亡原因并进行尸检。给药60 d后,麻醉处死,取腹主动脉血进行生化和生理指标的测定,包括蛋白定量(TP)、谷丙转氨酶(ALT/GPT)、谷草转氨酶(AST/GOT)、肌酐(CRE)、总胆固醇(T-CHO)、白蛋白(ALB)、白细胞计数(WBC)、淋巴细胞百分比(LYMPH#)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT)。解剖动物,观察各脏器情况,取心、肝、脾、肺、肾称重,算出脏器指数[脏器指数=脏器质量(g)/体重(g)]。

3 结果与结论

3.1一般状况 试验期间有个别动物死亡,经解剖未见异常,各组死亡情况见表1。各剂量组给药后大鼠皮毛整洁光滑,饮水量、摄食量、大小便、活动情况均未出现异常。结果表明,各组动物死亡并无剂量-反应关系,经解剖证实应属自然疾病或其他原因所致。

表1 各组动物死亡情况

3.2芪珠升白口服液对大鼠体重影响 实验期间,大鼠生长情况良好,对照组和试验组大鼠每周称重一次,平均体重变化见表2和3。可见,与对照组比较,低剂量雄性大鼠在给药一周体重显著性增加(P<0.05),低剂量和中剂量组雌性大鼠在给药一周体重显著增加(P<0.05),其他剂量组大鼠体重均随周龄而增长。

表2 芪珠升白口服液对雄性大鼠体重的影响

表3 芪珠升白口服液对雌性大鼠体重的影响

3.3大鼠剖检观察及其脏器指数的变化 给药60 d后,进行各组动物剖检,观察其脏器形态位置正常,色泽良好,各器脏间无粘连、无病理学变化。雌性大鼠的中、高剂量组的肾脏系数与对照组比较显著性升高(P<0.05),其他脏器系数无显著性差异(P>0.05)。结果见表4和表5。

表4 雌性大鼠脏器系数情况

表5 雄性大鼠脏器系数情况

3.4芪珠升白口服液对大鼠血常规指标的影响 实验终点,检测各剂量组大鼠的血常规指标水平。结果显示,雄性低剂量组大鼠HCT与对照组比较显著降低(P<0.05);雌性低剂量大鼠RBC与对照组比较显著性降低(P<0.05)。其他剂量组血常规指标均未见异常,与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。芪珠升白口服液对大鼠血常规的结果见表6和表7。

表6 雄性大鼠血常规指标情况

表7 雌性大鼠血常规指标情况

3.5芪珠升白口服液对大鼠血液生化指标的影响 实验结束后,对各剂量组大鼠血液生化指标分析,结果显示随着给药剂量的增加,大鼠生化指标未见明显的变化规律,且无雌雄差异,各剂量组血液生化指标与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。各剂量组大鼠生化指标检测结果见表8。

表8 各剂量组大鼠血液生化指标

4 讨论

近年来,人们对中药用药安全尤为重视,因此中药复方制剂的毒性研究显得十分必要[23-24]。前期急性毒性实验结果显示,实验小鼠未出现死亡和明显的急性毒性反应,各组织病理切片没有明显差异病变,且最大耐受量为人的72倍。在试验期间,各剂量组动物外观、行为活动、进食饮水等均未出现异常,生长状况良好;各剂量组动物体重均随周龄增长而增长。

在药物安全评价中,药物常会对一些器官产生影响[25]。通过计算脏器指数,发现与空白对照组比较雌性大鼠的中、高剂量组的肾脏系数显著性升高(P<0.05),其他剂量组均无显著差异。剖检结果显示,各剂量组动物脏器均未出现异常。

本试验的血液生化指标显示,大鼠连续给药60 d后,与空白对照组比较均未出现显著差异;血常规结果显示,与空白对照组比较,雄性低剂量组大鼠HCT显著降低(P<0.05);雌性低剂量大鼠RBC显著性降低(P<0.05),其他剂量组均无显著性差异。提示芪珠升白口服液并未对SD大鼠各项生化指标及脏器指数造成影响。

综上所述,在试验条件下长期合理使用芪珠升白口服液对SD大鼠的生长、血常规、脏器指数和血液生化指标无显著影响,以生药量26 g·kg-1、13 g·kg-1和6.5 g·kg-1,给药体积为2 g·mL-1,连续给药60 d,未出现毒性反应,表明芪珠升白口服液按临床拟用剂量长期服用具有较高的安全性,可作为临床用药安全性评价、不良反应监测和临床剂量设计的参考依据。因此,芪珠升白口服液具有良好的开发前景,有望成为治疗白细胞减少症的中药新药。