冉红志,樊 成,王雪飞,刘 静,康 婕,钱卫东,王 婷*

(1.陕西省动物疫病预防控制中心,陕西西安 710016;2.陕西省产品质量监督检验研究院,陕西西安 710048;3.陕西科技大学生物与医药学院,陕西西安 710021)

诺如病毒(Norovirus,NoV)又名诺瓦克病毒,为杯状病毒科诺如病毒属成员,是一种正链RNA病毒,基因组全长约7 600 bp[1]。诺如病毒根据VP1氨基酸序列可被分成10多个基因组型(如GⅠ-GⅦ),40多个基因亚型[2-4],其中GⅠ、GⅡ和GⅣ可感染人类,GⅡ可进一步分为22个基因型[5-7]。诺如病毒是一种重要的食源性病毒,能通过水源及贝类感染人类,造成急性胃肠炎[8]。近年来,许多国家均出现过诺如病毒疫情[9-10],经济贝类牡蛎是诺如病毒主要传播媒介之一。高温加热可有效杀灭牡蛎中的诺如病毒,但会破坏牡蛎的鲜美风味,人们倾向于生食或轻微烹煮牡蛎。如果牡蛎中存在活的诺如病毒,就会增加感染诺如病毒的风险[11]。

食品中诺如病毒的检测主要利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR),该方法操作繁琐,耗时长,工作量较大,且需要复杂的设备[12]。核酸恒温扩增技术,如重组酶介导的恒温扩增(RAA)、重组酶聚合酶恒温扩增(RPA)、依赖核酸序列的扩增(NASBA)、反转录重组酶和聚合酶等温检测(RT-RAPID)等技术,无需高温变性和梯度温度改变,借助特有的引物和酶可实现百万倍扩增靶标核酸。特别是CRISPR-Cas12a作为一种高精度生物识别工具[13],与RT-RPA组合使用,开发了RT-RPA-Cas12a检测平台[14],进一步提高了对病原体或突变位点的检测灵敏度和特异性。本研究建立的RT-荧光法和RT-Cas12a荧光法具有敏感、特异、耗时短、操作简便等优点,适用于现场快速检测。……