伊磊,刘庆晓,郑华,卢红华,张贵民

(鲁南制药集团股份有限公司 国家手性制药工程技术研究中心,山东 临沂 273400)

吗替麦考酚酯是麦考酚酸(MPA)的2-乙基酯类衍生物。MPA是高效、选择性、非竞争性、可逆性的次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂,可抑制鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径,抑制有丝分裂和同种特异性刺激物引起的T和B淋巴细胞增殖,还可抑制B淋巴细胞产生抗体,抑制淋巴细胞和单核细胞糖蛋白的糖基化,因此可抑制白细胞进入炎症和移植物排斥反应部位[1]。吗替麦考酚酯片由罗氏(Roche)研发,与皮质类固醇以及环孢素或他克莫司同时应用,适用于治疗接受同种异体肾脏、肝脏移植的患者中预防器官的排斥反应,以及适用于III-V型成人狼疮性肾炎患者的诱导期治疗和维持期治疗[2-4]。吗替麦考酚酯片先后在美国、欧盟、日本和中国等国家上市,商品名为Cellcept®,规格为0.5 g。之后,原研地产化也在中国获批上市,商品名为骁悉®,规格为0.5 g。

固体药物的溶出对吸收具有重要影响,因此药物在体外的溶出行为有可能预测其体内行为,同时药物体外溶出行为能够在一定程度上反映出制剂的质量[5]。本研究对自研制剂和原研制剂在模拟人体消化道内体液的四种溶出介质中的溶出曲线进行研究,并对其进行体外溶出行为的一致性评价。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UDT-812A-12型智能溶出仪(禄亘仪器设备有限公司);FADT-1200RC型智能溶出仪(上海富科思分析仪器有限公司);MDS-600PL型真空脱气机(禄亘仪器设备有限公司);Evolution 300型紫外可见分光光度计(型号:,赛默飞世尔科技有限公司);XS205型电子天平(梅特勒托利多科技有限公司);MS 204 TS型电子天平(梅特勒托利多科技有限公司);Sevencompact 型pH计(梅特勒托利多科技(中国)有限公司)。

1.2 试药与试剂

吗替麦考酚酯对照品(含量:99.8%,中检院);吗替麦考酚酯片原研制剂(商品名:骁悉®,规格:0.5 g,批号:M3567B01,上海罗氏制药有限公司);吗替麦考酚酯片(规格:0.5 g,批号:ZY01,ZY02,ZY03,鲁南制药集团股份有限公司)。

乙腈为色谱纯(Merk);盐酸,氢氧化钠,乙酸钠,冰醋酸,磷酸二氢钾等均为分析纯;水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶出测定方法的建立

参考FDA和PMDA公布的原研制剂信息,经一系列研究,初步建立了体外溶出测定方法。具体方法如下。

取本品,照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版第四部通则0931第二法),分别以pH值1.0盐酸溶液、pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)各900 mL为溶出介质,转速为50 r/min,依法操作,取溶液适量,弃去初滤液2 mL,精密量取续滤液1 mL,置20 mL容量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀,照紫外-可见分光光度法(中国药典2020年版第四部通则0401),在250 nm的波长处测定吸光度;另取吗替麦考酚酯对照品适量,精密称定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀释制成每1 mL中约含2.7 mg的溶液,摇匀,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀,同法测定,计算每片的溶出量。

2.2 方法学验证

2.2.1 专属性

取本品空白辅料适量(相当于本品1片)置1 000 mL容量瓶中,加900 mL溶出介质稀释,超声溶解。精密量取续滤液1 mL,置20 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,依法测定。结果表明,空白辅料不干扰本品溶出度的检测。

2.2.2 线性与范围

取吗替麦考酚酯对照品适量,精密称定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀释制成每1 mL中约含2.7 mg的溶液,作为对照品溶液。精密量取1 mL,置10 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为线性溶液。再分别精密量取0.1,0.2,0.4,0.8,1.0,1.2 mL,各置10 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,依法测定。结果见表1。

表1 线性与范围试验结果

结果表明,r≥0.990截距≤2.0%,四种溶出介质中吗替麦考酚酯质量浓度在2.77～32.86 μg/mL范围内线性关系良好。

2.2.3 中间精密度试验

取本品,由不同试验人员,在不同时间采用不同实验仪器依法测定,计算12份供试品溶出度的RSD值,结果见表2。结果表明本方法中间精密度良好。

表2 中间精密度结果(n=12)

2.2.4 准确度试验

精密量取“2.2.2线性与范围”项下对照品溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

称取空白辅料适量(相当于0.5 g吗替麦考酚酯),置100 mL容量瓶中,加溶出介质超声溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,作为空白辅料溶液。

供试品溶液配制:精密量取“2.2.2线性与范围”项下对照品溶液和空白辅料溶液各1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为100%浓度供试品溶液,同法分别配制10%,40%,80%,120%浓度的供试品溶液,每个浓度配制3份。

分别取对照品溶液和供试品溶液,依法测定。结果见表3。

表3 回收率试验结果

结果表明,本法测定溶出度的回收率均值在95%～105%,RSD均小于2.0%,准确度好。

2.2.5 滤膜吸附性试验

取本品1片,置1 000 mL容量瓶中,分别加溶出介质900 mL,超声使溶解;分别取离心(转速:8 000 r/min)的上清液及用滤膜(材料:水系PES;规格:0.45 μm;厂家:津隆®)弃去1,2,3,4,5,6 mL初滤液后的续滤液1 mL,置20 mL容量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀,依法测定。将经过离心处理的样品吸光度作为100%,过滤处理的样品吸光度与之进行对比。结果见表4。

表4 滤膜吸附性试验结果

结果表明,吗替麦考酚酯在四种溶出介质中弃去2 mL时,变化值小于2%,说明吗替麦考酚酯在四种溶出介质中弃去2 mL 即可达到饱和。

2.2.6 溶液稳定性

取吗替麦考酚酯对照品适量,精密称定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀释制成每1 mL中约含2.7 mg的溶液,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,室温放置。

取本品1片,置1 000 mL容量瓶中,加溶出介质900 mL超声使溶解,滤过,取续滤液1 mL,置20 mL容量瓶中,作为供试品溶液,室温放置。

对照品溶液和供试品溶液分别于0,2,4,12,24 h测定,记录吸光度,计算RSD值。结果表明:室温条件下,对照品溶液和供试品溶液24 h内吸光度的RSD均小于2%,溶液在24 h内稳定。

2.2.7 溶出仪耐用性

按照“2.1溶出测定方法的建立”项下方法,通过改变溶出仪的转速及水温,考察溶出仪的耐用性,具体试验条件为:A、改变波长:245,255 nm;B、改变转速:48,52 r/min;C、改变水温:36,38 ℃。结果显示,改变转速和水温时,于各溶出介质溶出终点取样,精密量取续滤液1 mL,置20 mL容量瓶中,加溶出介质稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。实验结果表明,与标准条件相比,改变溶出仪的转速及水温,溶出度无明显差异。说明本品的溶出度受溶出仪参数波动影响较小,耐用性良好。

2.3 自研制剂与原研制剂溶出曲线比较

取自研制剂(批号:ZY01、ZY02、ZY03)及原研制剂(批号:M3567B01)每批样品各12片,照“2.1溶出测定方法的建立”项下方法测定四种溶出介质中的溶出度,绘制溶出曲线,如图1～4所示,并比较自研制剂与原研制剂溶出行为的相似性。

图1 自研制剂与原研制剂溶出曲线(pH值1.0盐酸溶液)

图2 自研制剂与原研制剂溶出曲线(pH值4.5醋酸盐缓冲液)

图3 自研制剂与原研制剂溶出曲线(pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.8%SDS))

图4 自研制剂与原研制剂溶出曲线(水(含0.8%SDS))

自研制剂与原研制剂对应介质的溶出曲线采用f2因子计算相似性。自研制剂和原研制剂在pH值1.0盐酸溶液中15 min溶出度大于85%,无需比较f2,对自研制剂和原研制剂在pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)溶出结果比较f2,结果见表5。结果显示,三批自研制剂和原研制剂在pH值1.0盐酸溶液中15 min溶出度大于85%,相似。三批自研制剂在pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)四种溶出介质中相似因子均大于50(f2≥50),说明自研制剂与原研制剂在四种溶出介质中的溶出行为均相似。

表5 相似性(f2)结果

3 讨论

药物体外溶出试验是评价口服固体制剂质量的一种重要手段,药物体外溶出程度对人体吸收有着重要的影响[6]。本研究建立了可靠的体外溶出测定方法,对自研制剂与原研制剂体外溶出行为进行了一致性评价。经研究,自研制剂与原研制剂在pH值1.0盐酸溶液、pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)中溶出曲线均相似。通过评价自研制剂与原研制剂体外溶出的一致性,可以更好地控制其质量,保证与原研制剂的安全性及有效性[7]。