蒋菁蓉, 张天洪, 高崇勇, 王 元, 魏 超, 陈 婧

成都中医药大学附属医院 1.感染科;2.继续教育部;3.急诊科,四川 成都 610000;4.重庆医科大学附属第一医院綦江医院 肛肠科,重庆 401420

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染属于世界重要公共卫生问题,高达20亿人具有HBV感染史,约2.4亿人被诊断为慢性HBV感染,每年因HBV感染造成死亡的患者约有65万[1-2]。有研究报道,我国HBV感染人数占总人口比例约为10.00%[3]。机体长期HBV感染能使肝组织受到持续损伤,促使肝细胞产生纤维化病变,造成肝硬化。HBV-DNA载量可直接反映HBV感染后病毒复制活动情况,其持续增高造成的组织损伤属于肝硬化形成的主要原因[4]。既往研究表明,HBV感染期间,调节性T细胞参与免疫抑制过程,且与慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)紧密相关[5]。CD4+CD25+能够有效反映调节性T细胞变化[6]。白细胞介素33(interleukin-33,IL-33)属于新型炎症因子,可在CHB肝纤维化病变发生、发展过程中发挥作用[7]。本研究旨在探讨HBV感染患者HBV-DNA载量与外周血CD4+CD25+、IL-33水平、肝组织病理的相关性。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取成都中医药大学附属医院自2021年1月至2022年12月收治的104例CHB患者为研究对象。依据HBV-DNA载量将患者分为高载量组(HBV-DNA载量>1.0×105IU/ml,n=71)与低载量组(1.0×103IU/ml

1.2 研究方法 抽取所有患者空腹静脉血,以3 000 r/min离心10 min,获得血清样本,放入-20℃冰箱存储待测。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)法进行HBV-DNA载量测定。采用酶联免疫吸附法检测两组患者血清IL-33水平,试剂盒由上海心语生物科技有限公司提供。通过流式细胞分析仪(贝克曼库尔特公司生产,型号CytoFLEX)进行CD4+CD25+测定。肝组织病理检查:于超声引导下实施1 s穿刺活检术,获得约1.5 cm肝组织,注意其内部结构中有3个及以上完整汇管区,然后放入10%甲醛液固定,常规石蜡包埋处理。分别行苏木精-伊红染色、Masson染色、网状纤维染色,由两名经验丰富的病理医师阅片诊断。参照《病毒性肝炎防治方案》完成肝炎症活动分级评估和纤维化分期评估[9]。肝炎症活动分级评估分为G0～G4级,纤维化分期分为S0～S4期,S4期判断为肝硬化,S2～S3期判断为明显纤维化。

2 结果

2.1 两组患者一般资料比较 两组患者性别构成、年龄、体质量指数(body mass index,BMI)、吸烟史比例、酗酒史比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组患者一般资料比较/例(百分率/%)

2.2 两组患者外周血CD4+CD25+、IL-33比较 高载量组患者CD4+CD25+、IL-33均高于低载量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者外周血CD4+CD25+、IL-33比较

2.3 两组患者肝组织病理比较 两组患者纤维化分期、肝炎症活动分级比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者肝组织病理比较/例(百分率/%)

2.4 CD4+CD25+、IL-33与HBV-DNA载量相关性分析 Spearman相关性分析显示,CD4+CD25+、IL-33与HBV-DNA载量呈正相关性(r=0.492、0.513,P<0.05)。

2.5 多因素Logistic回归分析 多因素Logistic回归分析显示,CD4+CD25+、IL-33、纤维化分期、肝炎症活动分级均为HBV-DNA载量的影响因素(P<0.05)。见表4。

表4 多因素Logistic回归分析

3 讨论

HBV侵入人体后一般不会直接损伤肝细胞,而是干扰免疫调控系统,造成肝细胞病变。HBV感染后,会在体内繁殖,启动先天免疫反应,然后建立一种适应性免疫应答反应,在控制HBV的同时导致器官受损[10-11]。调节性T细胞参与免疫应答稳态以及免疫耐受维持过程,在自身免疫疾病、感染免疫、移植以及肿瘤免疫中起免疫调节作用。对于HBV感染者,调节性T细胞水平上调可能抑制其细胞免疫功能,引起免疫耐受,病毒持续存在并不断复制,为促使CHB发展为肝硬化以及肝癌的关键原因[12-13]。

本研究结果显示,高载量组患者CD4+CD25+、IL-33均高于低载量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。这提示,CD4+CD25+、IL-33可能与HBV感染患者HBV-DNA载量有关。CD4+CD25+能够对HBV感染特异性引起的CD4+、CD8+增殖作用加以抑制,在抗HBV感染免疫反应损伤中起重要作用[14]。人体多种组织中存在IL-33表达,其可在调节性T细胞引起的免疫应答中发挥作用,加重炎症反应,并对机体免疫平衡状态进行调节,与多种免疫疾病形成及发展密切相关[15-16]。侯丽娟等[17]研究发现,IL-33表达和HBV感染存在紧密联系,且能够反映肝纤维化情况。进一步Spearman相关分析显示,CD4+CD25+、IL-33与HBV-DNA载量呈正相关(r=0.492、0.513,P<0.05)。这提示,CD4+CD25+、IL-33水平越高,HBV感染患者HBV-DNA载量越大。这可能是由于机体CD4+CD25+水平或功能障碍,减弱了机体对病毒引起的细胞毒性T细胞以及效应T细胞应答反应,导致HBV无法被完全清除,使机体处于免疫耐受状态;HBV-DNA载量升高时HBV复制较为活跃,机体出现抗HBV免疫应答行为,而这种免疫应答能够引起肝炎症反应,导致IL-33合成增加。HBV感染后,机体通过免疫功能清除病毒的同时,能够损伤肝细胞,这类受损细胞修复过程与细胞外基质大量沉积,导致肝纤维化病变[18]。有研究报道,肝炎症程度以及纤维化分期均与血清HBV-DNA载量密切相关[19]。本研究中多因素Logistic回归分析显示,CD4+CD25+、IL-33、纤维化分期、炎症分级均为HBV-DNA载量的影响因素(P<0.05)。HBV复制后主要经机体免疫功能介导肝组织病理损害,检测HBV-DNA载量能够了解HBV复制活跃度,检测水平越高,说明HBV复制行为越活跃,对患者肝组织产生的伤害越大,加剧肝炎症活动以及纤维化病变。因此,临床对于高水平HBV-DNA载量的CHB患者,需要重视肝炎症活动以及纤维化进展,适时给予肝病理活检,了解肝病理状态[20]。

综上所述,HBV感染患者HBV-DNA载量与外周血CD4+CD25+、IL-33水平、肝组织病理密切相关。CD4+CD25+、IL-33水平越高,HBV-DNA载量越大,肝纤维化病变与炎症程度越严重。