雷 艳,詹世淮,杨 兰,王佳伟,王水良,赵 猛,张胜行△

(中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院:1.福建省干细胞临床应用中心;2.福建省适配体技术重点实验室;3.基础医学实验室,福州 351100)

人脐带间充质干细胞来源的外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cells derived exosomes,hUC-MSCs-Exo)可以转运核酸、脂质和蛋白质,参与细胞间的信息交流,具有与MSCs相似的组织损伤修复和再生功能[1-2]。急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是一种以肾功能减退为特征的症候群,缺氧、肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,IRI)、肾毒性和炎症等均可导致AKI[3-4]。已有研究表明,MSCs-Exo种携带的miRNA和蛋白能减轻肾脏缺血再灌注损伤,减少细胞凋亡,促进细胞增殖,从而修复肾损伤[5];Exo中含有与血管生成(血管内皮生长因子、促血管新生蛋白因子)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号相关的营养蛋白分子而促进肾脏再生[6-7]。MSCs-Exo可以通过调节ATL16L增强细胞自噬,预防顺铂药物所致的AKI[8]。尽管MSCs-Exo显示出肾脏保护作用,但MSCs-Exo对肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells,HKC)的作用机制仍不清楚。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1试剂

衣霉素(tunicamycin,TM)购于瑞士Enzo Life Sciences公司。DMEM DF12、DMEM低糖培养基均购于美国Hyclone公司。胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、抗体PARP、LC3B、Atg5、Beclin1、β-actin、兔免疫球蛋白G(IgG)、鼠IgG均购于美国Cell Signaling Technology公司。流式抗体CD63、CD9、CD81,碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染料,FITC Annexin Ⅴ凋亡检测试剂盒购于美国Biolenged公司;PierceTMBCA蛋白定量试剂盒购于美国Thermo公司。增强化学发光(enhanced chemiluminescence,ECL)蛋白显色液购于德国Advansta公司。CCK-8细胞增殖检测试剂盒购于印度MedChem公司。ExoQuick-TC试剂盒购于美国SBI公司。

1.1.2细胞

293T细胞和HKC购于中国科学院上海细胞生物学研究所;hUC-MSC由福建省干细胞应用工程技术研究中心提供,取P3代细胞。

1.2 方法

1.2.1细胞培养

HKC培养于10% FBS的高糖培养基中,细胞均置于含体积分数为5% CO2、饱和湿度的37 ℃培养箱中。……