韦泽丰 郑金花 王自强

慢性肾小球肾炎(CGN)是一类免疫介导的原发性肾小球疾病,以蛋白尿、水肿、高血压、血尿为基本临床特征,约占慢性肾脏病患者的20%[1]。CGN易复发,如疾病进展且未得到有效治疗,最终会导致肾功能衰竭,严重威胁患者生命健康。CGN的发病机制多种多样,其中免疫介导的炎症损伤是CGN发生发展的中心环节[2]。微小RNAs(miRNAs)是一组小的RNA片段,在免疫炎症介导的疾病调控机制中发挥重要作用。在已知的miRNAs中,miR-223是免疫系统进化和稳态的关键因素,主要调节特定的炎症反应。相关研究报道结果显示,miR-223在慢性肾脏病中表达下调[3],miR-223下调可通过促进肾小球内皮细胞活化加重IgA肾病组织损伤[4]。但miR-223在CGN中的研究报道较少,因此,本研究以CGN大鼠模型为研究对象,旨在探索miR-223在CGN中的作用及相关分子机制。

材料与方法

1.材料:SPF级雄性SD大鼠,体质量180～220 g,购自海南药物研究所有限责任公司[生产许可证号:SCXK(琼)2020-0007]。大鼠在21～23 ℃、相对湿度50%～60%、12 h光暗交替的标准条件下饲养,适应性喂养1周后开始实验。主要试剂:阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)干粉、弗氏不完全佐剂购自美国Sigma公司;miR-223激动剂(miR-223 agomir)及其阴性对照(NC agomir)均购自广州市锐博生物科技公司;重组人IL-6(rhIL-6)购自上海MEC公司;HE染色试剂盒、Masson染色试剂盒均购自武汉佳维斯生物医药公司;尿蛋白定量试剂盒、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、胱抑素C(Cys-C)、视黄醇结合蛋白(RBP)、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1试剂盒均购自南京建成生物工程研究所;反转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒均购自河北三狮生物科技有限公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、IL-6、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)一抗及山羊抗兔IgG二抗均购自英国Abcam公司。……