陈 立,阮小风

(1. 湖北文理学院附属医院 襄阳市中心医院,湖北 襄阳 441021;2. 湖北中医药大学,湖北 武汉 430065)

随着糖尿病发病率在世界范围内迅速增长,其主要并发症糖尿病肾病已成为终末期肾病的首要病因之一[1]。目前尚无确切有效的治疗方法能阻止糖尿病患者进展为糖尿病肾病,而由此带来的终末期肾病常需要血液净化治疗,致死致残率高,给社会、家庭带来沉重的负担。本课题组前期临床研究发现,新加肾元汤能降低慢性肾衰竭患者血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN),抑制氧化应激反应[2]。本实验通过构建糖尿病肾病模型,观察新加肾元汤对模型大鼠肾纤维化及肾脏Klotho/转化生长因子β1(TGF-β1)信号通路的影响,旨在进一步探讨新加肾元汤治疗糖尿病肾病的作用机制。

1 实验材料与方法

1.1动物 SPF级SD雄性大鼠50只,体重(230±10)g,购于湖北省实验动物研究中心,许可证号:SCXK(鄂)2020-0018。大鼠饲养于湖北省食品药品安全评价中心动物房,温度(25±1)℃,相对湿度(50±10)%。本研究通过襄阳市中心医院伦理委员会实验动物伦理审批(2020-021)。

1.2药品与试剂 新加肾元汤,由炙黄芪(批号:2008001S)30 g、淫羊藿(批号:2006001S)20 g、三七粉(批号:2006005S)3 g、酒大黄10 g(批号:2011001S)组成,各味药由襄阳市中心医院中药房提供;厄贝沙坦,瀚辉制药有限公司,批号:20097211。 一抗Klotho( Santa公司,批号:sc-515942),一抗Ⅳ型胶原蛋白(Collagen Ⅳ)、纤连蛋白(Fibronectin)、GAPDH(Abcam公司,批号分别为ab6586、ab268020、ab181602),一抗TGF-β1(武汉三鹰公司,批号:21898-1-AP),一抗层黏连蛋白(LN,Novusbio公司,批号:NB300-144),多聚甲醛(国药集团化学试剂有限公司,批号:80096618),苏木素(Sigma公司,H9627-25G),SCr和BUN检测试剂盒(南京建成公司,批号分别为C013-2、C011-2),RIPA总蛋白裂解液(ASPEN公司,AS1004),ECL化学发光检测试剂盒(ASPEN公司,AS1059),显影定影液(ASPEN公司,AS1027)。……