聂启鸿 钟晓鸣

LncRNA-GAS5 被确定为多种癌症的抑癌基因,且被证实参与了结肠癌的发生发展。但是LncRNA GAS5在结直肠癌中的作用尚不明确。有研究显示,LncRNA GAS5 通过干预磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)通路参与调控非小细胞肺癌细胞对顺铂(DDP)的化学敏感性［1］。以5-FU 为基础的化学治疗方案可有效治疗结直肠癌,对改善无手术机会的患者的生存质量、延长生存期尤为重要。但5-FU 耐药大大限制其疗效［2］。5-FU 耐药机制的产生及应对策略是目前临床工作中亟需解决的问题。因此,本研究将探讨LncRNA GAS5 在5-FU 耐药结直肠癌细胞中的表达变化及其对5-FU 耐药结直肠癌细胞生物学行为的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系 人结肠癌细胞系HCT-8 和SW480 均购自American Type Culture Collection。

1.1.2 主要仪器与试剂 二氧化碳恒温孵育箱(Thermo Fisher Scientific),伯乐化学发光凝胶成像仪(美国伯乐),RT-PCR 仪(ABI),Applied Biosystems 9700 PCR仪(Life Technologies),凝胶图像分析仪(Alpha innotech),流式细胞仪(BD FACalibor)。通用型RNA提取试剂盒(广州美基生物),Opti-MEM 培养基(Gibco BRL),CCK-8 试剂盒、Lipofectamine 2000(Invitrogen),细胞RNA 提取试剂盒(北京天根生物),兔抗caspase-3 多克隆抗体、兔抗聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)多克隆抗体、兔抗B 淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)多克隆抗体、兔抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)多克隆抗体、兔抗Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)多克隆抗体、过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)(Affinity),LV5-GAS5 Vector(上海吉玛)。

1.2 细胞培养、传代 将HCT-8 细胞系或SW480 细胞系用含10% FBS、100 IU/ml 青霉素、100 µg/ml 链霉素的McCoy's 5A 培养基重悬细胞,接种于细胞培养瓶,37℃、5%二氧化碳孵育箱,当细胞生长至80%融合度时传代。弃去培养基、清洗、消化、终止消化、离心,接种于培养皿中传代,每2 天换1 次培养基,取处于对数生长期的细胞用于后续实验。……