徐伟忠 陈爱华

糖尿病血管病变是一种最常见的糖尿病并发症,慢性血管并发症常伴有血管内皮功能障碍,这是糖尿病患者致残、死亡的主要原因[1,2]。达格列净(dapagliflozin,DAPA)是首个上市的钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂降糖药物,目前市面上还有卡格列净、恩格列净、依格列净、鲁格列净、托格列净等SGLT-2抑制剂[3,4]。微小RNA(miRNA)是一种长度在18～25个核苷酸的内源性单链内编码的保守小分子,其通过调控靶基因的转录、翻译过程影响蛋白的表达,进而广泛参与人类各种疾病的发展[5,6]。miR-140-5p是新发现的一种糖尿病失调miRNA[7],但是其在糖尿病血管病变中的作用及潜在的机制是否与DAPA之间存在关联尚未可知。本研究拟以高糖诱导的内皮细胞为研究对象,观察DAPA对其中miR-140-5p、FNDC5的表达及miR-140-5p、FNDC5对内皮细胞增殖、凋亡的影响,揭示DAPA发挥治疗作用与miR-140-5p/FNDC5之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 人脐静脉血管内皮细胞HUVEC购自美国菌种保藏中心;达格列净(商品名:安达唐)购自阿斯利康制药有限公司;Lipofectamin 3000转染试剂购自赛默飞世尔科技(中国)公司;细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK8)购自日本同仁化学研究所;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin v-fluoresceine isothiocyanate,annexin V-FITC)/碘化丙锭(propidium iodide,PI)细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天研究所;DNA/RNA抽提试剂盒、实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)试剂盒均购自日本Takera;双荧光素酶报告基因试剂盒购自上海信裕。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养:人脐静脉血管内皮细胞HUVEC用DMEM培养基(混有10%胎牛血清+1%青链霉素)培养,在5%CO2的37℃恒温细胞培养箱中常规培养。隔天更换1次培养液。

1.2.2 细胞转染与分组:葡萄糖(5.5、30 mmol/L)处理HUVEC细胞6 h分别标记为 正常NG组、高糖HG组。……