王卉怡 肖冬梅

感染性阴道炎是适龄女性比较多见的感染性疾病,而念珠菌是最常见的阴道黏膜真菌,其临床症状主要为分泌物增加,呈现豆腐渣样或凝乳状,伴有外阴瘙痒,并且发病频繁,甚至诱发宫颈炎、不孕和流产。大量流行病学观察数据证实［1］,近几年由于抗生素的大量使用,导致耐药性菌株出现,尤其是感染念珠菌导致的阴道炎,其发病率每年都明显上升,绝大部分适龄女性在一生当中至少有一次感染过念珠菌的经历,这会显著干扰患者的健康。临床证明,性传播是诱发适龄妇女罹患念珠菌感染性阴道炎的重要途径［2］。另外患者阴道的防御功能低下也会导致念珠菌在阴道大量繁殖。此次研究的目的是通过分析念珠菌感染性阴道炎的菌种分布特点、敏感性及Th1/Th2细胞因子变化特点,帮助临床更加合理选择抗生素和治疗方法。现将详细过程报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2021 年1～12 月在沈阳市铁西区中心医院就诊的456 例疑似念珠菌感染性阴道炎患者的阴道分泌物,培养其真菌标本。患者年龄19～52 岁,平均年龄(41.2±9.1)岁；病程6 d～2 年,平均病程(6.2±6.0)个月。在明确诊断为念珠菌阳性的标本中随机抽取100 例作为观察组,另抽取相同时段本院100 例体检健康女性作为对照组。纳入标准：符合感染性阴道炎的诊断标准；既往未使用抗生素。排除标准：合并其他阴道疾病；近期使用过抗真菌类药物的患者；处于妊娠或哺乳期的患者。

1.2 方法

1.2.1 培养鉴定 阴道清洁后,用无菌棉签从阴道后穹窿提取少量分泌物,随后送入实验室,通过显微镜发现假菌丝后,将标本放置在沙保弱培养基中,恒温保存2 d,把对比的酵母样真菌放置在科玛嘉念珠菌显色培养基中,恒温保存2 d。通过菌落的着色进行判定,若菌落呈现为翠绿色,则判读为白色念珠菌。无法明确判读菌种的标本通过API-20CAUX 鉴定试剂盒进行比较。

1.2.2 药敏试验 通过酵母真菌药敏试片对所有标本进行药敏比较。把每个比较完毕的标本,放置在5×105CFU/ml 的混悬液中,平铺在琼脂培养皿上,恒温干燥20 min 后放置在各药敏试纸片,药敏试纸片选择两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑进行药敏比较。恒温放置1 d 后,通过药敏试片的比较标准进行判读。

1.2.3 Th1/Th2 型细胞因子检测 对两组研究对象通过阴道后穹窿提取分泌物,放置在含蛋白酶抑制剂的PBS 液中,经离心机离心后抽取上清液500 μl,再通过酶联免疫吸附试验检测所有标本的IFN-γ、IL-12、IL-4、IFN-γ/IL-4 水平。

1.3 观察指标 分析念珠菌菌种分布情况及药敏试验结果；比较两组阴道分泌物中Th1/Th2型细胞因子水平,包括IFN-γ、IL-12、IL-4、IFN-γ/IL-4。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 念珠菌菌种分布情况分析 456 例疑似念珠菌感染性阴道炎患者的阴道分泌物培养出278 株念珠菌,占比为60.96%(278/456)。其中白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌及其他念珠菌占比分别为77.70%、8.99%、1.80%、4.32%、7.19%。见表1。

表1 278 株念珠菌菌种分布情况分析(株,%)

2.2 念珠菌药敏试验结果分析 念珠菌对两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑均具有较高的敏感性,其中对两性霉素B 的敏感性最高,均为100.0%；白色念珠菌对各抗真菌药物的敏感性均最高。见表2。

表2 278 株念珠菌药敏试验结果分析(%)

2.3 两组阴道分泌物中Th1/Th2 型细胞因子水平比较观察组阴道分泌物中IFN-γ、IL-12、IL-4 水平明显高于对照组,IFN-γ/IL-4 明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 两组阴道分泌物中Th1/Th2 型细胞因子水平比较()

表3 两组阴道分泌物中Th1/Th2 型细胞因子水平比较()

注：与对照组比较,aP＜0.05

3 讨论

一般情况下,念珠菌广泛分布在人体的皮肤、呼吸、消化道、尿道及生殖黏膜中,是人体正常菌种。研究发现,大约10%的健康妇女也能在阴道分泌物中培养出念珠菌,但是未出现感染性阴道炎的症状［3］。如果人体的抵抗力下降、长期使用抗生素、阴道内环境出现异常变化时就会出现念珠菌感染性阴道炎,所以念珠菌是一种条件致病菌。此次研究中,有278 株念珠菌的检测结果为阳性,而其中白色念珠菌的检出率最高,为77.70%。所以临床中念珠菌感染性阴道炎病例以白色念珠菌为主要感染病原菌。临床上各种菌株针对各种抗生素的敏感性差距明显,所以念珠菌针对各种抗真菌药的敏感性也不同,而且抗真菌药多为剂量依赖性的药物,在临床使用当中通常可能要少量增加剂量［4］。所以在治疗念珠菌感染性阴道炎的过程中必须选取恰当的抗真菌药,这就要求临床熟悉念珠菌菌种的种类和相应的耐药性情况。此次试验的药敏性检测结果说明,临床中使用的抗真菌药物对念珠菌都有明显的敏感性,尤其是两性霉素B,其作用于所有类型的念珠菌敏感性均为100.0%。除了两性霉素B,5-氟胞嘧啶、伏立康唑对于白色念珠菌的敏感性也＞90%,而伊曲康唑、氟康唑的敏感性均＞85%。证实上述的常用抗真菌药抑制白色念珠菌的效果都十分明显。而克柔念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌等菌株对临床中使用的这些抗真菌药物敏感性相对降低,而且敏感性也有显著差异。研究发现,念珠菌是阴道内一种正常存在的菌群,其作用是保持阴道内环境的自洁功能,并保持各种菌群的平衡［5］。但是临床还无法明确解释人体感染念珠菌后的自身抵抗机理,但当人体的免疫功能下降时或者阴道内环境发生异常变化时就会诱发念珠菌感染性阴道炎。研究发现,Th1/Th2 的异常是免疫回应机制的重要标志,可以体现许多疾病的病理生理反应。IFN-γ、IL-12 等细胞因子可以加速Th 细胞经Th0 向Th1 的转变,增加介导吞噬细胞的作用,起到免疫保护的功能,尤其是针对外来病原菌的侵入；IL-4、IL-10 等细胞因子可以加速Th 细胞经Th0 向Th2 的转变,提高人体对外来病原菌的敏感性［6］。IFN-γ 代表了Th1 细胞的主要功能,可以提高人体免疫力；IL-12 是加速Th1 细胞转变的主要细胞因子,可以经B 细胞加速生成免疫球蛋白G(IgG),从而起到连续抑菌保护功能［7］。此次试验结果证实,念珠菌感染性阴道炎患者阴道分泌物含有大量IFN-γ、IL-12,并且比健康女性显著升高,证明在疾病早期,细胞自我免疫的过程需要Th1 进行催化。IL-4 属于细胞因子Th2 型,由T 细胞合成,可阻止巨噬细胞和中性粒细胞对病原微生物的吞噬能力,降低消灭病原菌的能力［8］。此次研究发现,念珠菌感染性阴道炎患者的阴道分泌物IL-4 含量显著高于健康女性,证明Th2 发生激发反应。通过研究Th1/Th2 的改变规律,发现念珠菌感染性阴道炎患者IFN-γ/IL-4 水平较健康女性显著降低,说明如果Th2 型细胞的抑制作用超过Th1型细胞促进作用,就会导致人体的免疫功能下降。

综上所述,念珠菌感染性阴道炎以白色念珠菌感染为主,菌种不同对抗菌药物敏感性也不同,所以临床上要通过对菌种的判断合理选择抗生素,防止念珠菌感染性阴道炎患者出现局部免疫功能紊乱现象。