孟聪聪 张艳凯 于利利 马 华 赵 瑞 程立鹏 张伟亚

Krüppel样因子5(KLF5)属于一类锌指蛋白转录因子,属于KLF家族成员之一,KLF5因子参与多种肿瘤细胞生物学行为,如增殖、分化、凋亡,且在多种组织中均有不同程度的表达,如前列腺癌[1]、结肠癌[2]以及胰腺癌[3]等。具有PDZ结合域的转录共激活因子(TAZ)属于一类14-3-3结合蛋白,可参与细胞增殖、迁移及侵袭等多种生物学行为。研究发现[4],KLF5可介导Hippo信号通路与TAZ因子相互作用,进而参与肿瘤的发生和发展,进一步发现TAZ其中WW结构域可与KLF5的PY序列结合,可预防KLF5被泛素化降解,此项研究进一步表明KLF5与TAZ之间可能存在协同作用共同参与肿瘤进展。UHRF1为一类核蛋白基因,且与细胞生长、细胞周期关系密切。研究称[5],UHRF1在细胞增殖及细胞周期G1-S期转换过程中具有关键作用。且UHRF1在多种肿瘤组织中均有表达,如宫颈癌[6]、乳腺癌[7]以及胰腺癌[8]等。由此,研究KLF5、TAZ以及UHRF1在肿瘤疾病中的作用具有重要的研究价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2018年6月至2021年6月在我院就诊的甲状腺乳头癌患者150例,所有研究对象均同意术中留取病灶组织标本以及配对的癌旁组织标本。纳入标准:①均经过病理诊断确诊为甲状腺乳头癌;②均为首次进行手术治疗;③以往均未进行放化疗及内分泌治疗。排除标准:①心、肺、肾等重要脏器功能异常者;②长期采用免疫抑制剂治疗者;③既往合并感染类疾病者;④合并其他脏器恶性肿瘤的患者。

甲状腺乳头癌(n=150):其中男性56例,女性94例,年龄(45.8±5.7)岁,临床分期:Ⅰ期40例,Ⅱ期55例,Ⅲ期37例,Ⅳ期18例,平均肿块大小(1.08±0.72)cm,淋巴结转移71例,多灶性52例,甲状腺外侵犯73例。研究对象均已签署知情同意书,且本研究已获得我院伦理委员会的批准。

1.2 免疫组织化学方法

获取上述甲状腺乳头癌组织标本及癌旁组织标本,石蜡切片,脱蜡、水化,PBS溶液修复抗原,冷却40 min后,采用H2O2溶液孵育,10 min后,阻断过氧化物酶活性,山羊血清封闭结合,再分别将兔抗KLF5、TAZ、UHRF1抗体加入切片,于4 ℃环境过夜,PBS清洗,再滴加二抗抗体,孵育20 min,滴加辣根过氧化物的链霉卵白素溶液进行孵育,20 min后,加DAB溶液显色,再加入苏木精溶液复染,不同梯度乙醇溶液脱水,二甲苯荣毅仁透明,中性树胶溶液封片处理。

判定标准[9]:(1)细胞显色剂深浅评分:0分为无染色;1分为淡黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色。(2)显色细胞的百分率评分:随机选取100个细胞,细胞阳性率<5%表示0分;细胞阳性率在5%～25%表示1分;细胞阳性率在26%～50%表示2分;细胞阳性率>50%表示3分。将细胞显色剂深浅评分和显色细胞的百分率评分相加,0分记为阴性;≥1分记为阳性。

1.3 统计学方法

应用SPSS 25.0软件统计分析,KLF5、TAZ、UHRF1蛋白阳性表达率均以%表示,组间比较进行χ2检验,P<0.05表示组间存在意义。Pearson相关性分析KLF5、TAZ、UHRF1蛋白表达的关系,并进行Kappa检验。

2 结果

2.1 KLF5、TAZ、UHRF1在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织的表达

甲状腺乳头状癌组织中KLF5、TAZ、UHRF1蛋白阳性表达率(75.33%、70.00%、64.00%)均高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 KLF5、TAZ、UHRF1在甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中的表达(例,%)

2.2 KLF5、TAZ、UHRF1表达与甲状腺乳头癌临床病理参数的关系

不同临床分期、肿瘤组织大小、淋巴结转移、甲状腺外侵犯的KLF5、TAZ、UHRF1表达比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),不同年龄、性别以及有无多灶性的KLF5、TAZ、UHRF1表达比较,差异均不存在统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3 甲状腺乳头癌组织中KLF5、TAZ、UHRF1表达相关性

KLF5蛋白表达分别与TAZ、UHRF1蛋白表达呈正相关(γ=0.594,0.491,P均<0.05),TAZ蛋白表达与UHRF1蛋白表达呈正相关(γ=0.486,P<0.05)。

3 讨论

KLF5因子包括两个结构域,即锌指结构域和功能性结合结构域,其中锌指结构域可以与启动子区域GC位点结合,调节相关靶基因的转录水平,另外功能性结合结构域可以激活或者抑制转录活性。研究显示[10],KLF5在多种肿瘤疾病中存在高表达现象,且表达水平越高患者的预后越差。在严云青等的研究中[11],研究结果显示在肝癌细胞中,KLF5表达呈现上调,且其可以介导PI3K/Akt/Snail信号通路参与细胞的增殖及转移。但是也有研究发现[12],KLF5在三阴性乳腺癌细胞中的表达较低。也有研究报道[13],KLF5在结肠癌组织中的表达较低,且结肠癌细胞中过表达KLF5可以抑制肿瘤细胞的生长。本次研究结果显示,KLF5在甲状腺乳头癌组织中的表达显著高于癌旁组织,表明KLF5表达与甲状腺乳头癌发生和发展有关。进一步研究发现,KLF5表达与甲状腺乳头癌临床分期、肿瘤组织大小、淋巴结转移、甲状腺外侵犯均有关,此项研究结果进一步表明KLF5在甲状腺乳头癌不同发展过程中均具有显著差异,且甲状腺乳头癌进展与KLF5表达有关,甲状腺乳头癌进展越严重,KLF5表达越高。

TAZ主要参与Hippo信号通路,正常生理条件下,在多种组织器官中均存在不同程度的表达,也可以参与组织分化;病理条件下,可参与肿瘤细胞侵袭、增殖及转移等过程。研究显示[14],抑制结肠癌细胞中TAZ表达以后,结肠癌细胞活性明显下降,同时细胞迁移及侵袭能力也显著下降,此项研究表明TAZ在结肠癌中具有重要作用。本次研究结果显示,甲状腺乳头癌组织中TAZ蛋白表达显著高于癌旁组织,并且还与甲状腺乳头癌临床分期、肿瘤组织大小、淋巴结转移、甲状腺外侵犯等均存在关系,此项研究表明TAZ也参与了甲状腺乳头癌进展。

UHRF1在多种肿瘤疾病中均有不同程度表达,如乳腺癌[15]、食管癌[16]、胰腺癌[17]等。E2F1为UHRF1上游调节因子,p53可以介导E2F1因子,进而对UHRF1表达发挥抑制作用,由此表明p53基因活性下降也是造成肿瘤组织内UHRF1异常过表达的原因之一。如耿冲等[18]研究称,UHRF1在乳腺癌组织中表达较高,且乳腺癌患者预后复发有关。本次研究结果发现,UHRF1在甲状腺乳头癌组织中表达高于癌旁组织,且与甲状腺乳头癌临床分期、肿瘤组织大小、淋巴结转移、甲状腺外侵犯等病理参数有关,表明UHRF1与甲状腺乳头癌浸润程度存在关系。

上述研究结果均表明,KLF5、TAZ、UHRF1均与甲状腺乳头癌发生和发展存在关系,推测三者可能存在关联性,通过Pearson相关性分析,KLF5、TAZ、UHRF1之间均存在正相关性,推测KLF5、TAZ、UHRF1三者可能共同参与了甲状腺乳头癌进展。

综上所述,甲状腺乳头癌组织中KLF5、TAZ、UHRF1的表达均上调,并且均与临床分期、肿瘤组织大小、淋巴结转移、甲状腺外侵犯等病理参数存在关系。但是本次研究也存在不足,关于KLF5、TAZ、UHRF1三者共同作用参与甲状腺乳头癌疾病中的机制还需要深入研究。