王沙沙,黄绍敏,张珂珂,宋 晓,3

(1.河南省农业科学院小麦研究所/河南省小麦生物学重点实验室,河南郑州 450002;2.河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所,河南郑州 450002;3.河南省农业生态环境重点实验室,河南郑州 450002)

相比于拟南芥和水稻,小麦硝酸盐转运蛋白方面的研究主要集中在小麦NRT1基因家族成员的鉴定方面[6,24-26],而对于每个家族成员潜在的分子机制尚不清楚。因此,本研究拟克隆小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1,并通过生物信息学分析、不同组织qRT-PCR分析及多态性筛选等方法对其进行研究,为解析小麦硝酸盐转运蛋白基因的生物学功能提供参考,并为进一步开发其功能标记及小麦分子标记辅助育种奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

小麦品种许科168、郑麦113、中育1211、周麦27、漯麦18和郑品麦8号来自黄淮麦区,具有不同的遗传背景且氮利用效率差异明显。取普通小麦中国春露地栽培自然生长的幼苗根、茎、叶,用于分析TaNRT1.1三个同源基因在小麦不同组织材料中的表达模式。取小麦品种周麦27、许科168、郑麦113苗期的根,用于分析TaNRT1.1基因不同等位变异在小麦根中的表达模式。所有小麦品种均由河南省农业科学院小麦研究所小麦营养与品质研究室提供。

1.2 DNA、总RNA的提取及cDNA合成

参照Chen等[27]的SLS(十二烷基肌氨酸钠)方法提取小麦种子DNA,并略有改进。利用Trizol法提取中国春幼苗的根、茎、叶总RNA。用PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒(TaKaRa,大连)说明书将RNA反转录为cDNA,-20 ℃保存。

1.3 小麦 TaNRT1.1基因的克隆

根据水稻OsNRT1.1B基因(LOC_Os08g12780)序列,通过中国春参考基因组2.0以及Ensemble Plants进行同源Blast,获得小麦硝酸盐转运蛋白基因TaNRT1.1(TaNRT1.1-1A、TaNRT1.1-1B、TaNRT1-1D)及其cDNA序列。……