王莉,曾浩洋（湖南省邵阳市食品药品检验所,湖南 邵阳 422099）

川芎是一种中药植物，具有活血行气、祛风止痛的功效[1]，是临床常用来治头痛的要药，也被赞誉为“血中气药”。川芎炮制历史悠久，历代的炮制方法有酒蒸、酒煮、炒黄、麸炒等，现代主要应用生品和酒炙[2]。川芎生品气厚辛香走窜，活血行气，祛风止痛力强；其酒炙后引药上行，增强其活血、行气、止痛的作用。有文献表明，同等剂量下，川芎酒炙后药效较生品更为显著[3]。川芎中所含主要成分为阿魏酸等[4]，广泛应用于临床治疗。酒川芎为《湖南省中药饮片炮制规范（2010年版）》收载的饮片品种[5]。该标准中未收载含量测定方法，为使酒川芎饮片质量得到更有效地控制，参照《中国药典》2015年版一部川芎含量测定项下方法[6]，采用高效液相色谱法对酒川芎中阿魏酸的含量进行了研究，具体内容如下。

1 仪器与试药

图2 酒川芎样品色谱图

仪器：岛津LC-20A高效液相色谱仪（DAD检测器）；MS105DU电子天平（感量0.01mg），为梅特勒-托利多仪器有限公司生产。

试剂：甲醇（色谱纯，TEDIA公司，19035087），水为超纯水；其余所用试剂均为分析纯。

对照品：阿魏酸（110773-201614，纯度：99.0%），选自中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备 取阿魏酸对照品10.87mg，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液（215.226μg/ml）。精密吸取对照品储备液，加70%甲醇依次稀释成浓度为107.613μg/ml、53.8065μg/ml、21.5226μg/ml、10.7613μg/ml、5.38065μg/ml、2.15226μg/ml的对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备 取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件 色谱柱：Ultimate C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-1%醋酸水溶液（30∶70）；流速1.0mL·min-1；检测波长为321nm；柱温35℃。理论板数按阿魏酸计，不低于4000。

取对照品溶液、供试品溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图（见图1-2）。结果表明，样品中其他成分对阿魏酸的测定无干扰。

图1 阿魏酸对照品色谱图

2.4 线性关系考察 精密吸取浓度为107.613μg/ml、53.8065μg/ml、21.5226μg/ml、10.7613μg/ml、5.38065μg/ml、2.15226μg/ml的对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量（ng）为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：y=5648.3x-6482.8，R2=0.99999。结果表明：阿魏酸对照品在21.5226-1076.13ng范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取同一酒川芎供试品溶液（批号2019090911，生产企业：湖南然润堂中药有限公司），连续进样6次，每次10μl，记录色谱峰面积，计算RSD（n=6）为0.32%，仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一酒川芎供试品溶液（批号2019090911，生产企业：湖南然润堂中药有限公司），分别于配制后的0小时、1小时、2小时、4小时、8小时、16小时、24小时精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，其峰面积RSD为0.41%，结果表明：供试品溶液在配制后24小时内稳定。

2.7 重复性试验 取同一酒川芎供试品（批号2019090911，生产企业：湖南然润堂中药有限公司），依法制备6份供试品溶液，测定并计算，RSD（n=6）为0.32%，表明重复性良好。

2.8 回收率试验 取已测定含量的同一酒川芎供试品（批号19102703-1，生产企业：湖南振兴中药有限公司）（含阿魏酸2.191mg/g）约0.25g（9份），精密称定，置锥形瓶中，按80%、100%和120%的水平精密加入浓度为215.226μg/ml的阿魏酸对照品适量（见表1），依法制备供试品溶液，测定并计算，结果平均加样回收率为98.8%，RSD为1.23%。

表1 加样回收率试验结果表

2.9 样品含量测定结果 本次实验收集到的样品为湖南省内四个厂家提供的样品，原药材来源于两个不同省份。样品信息表见表2。对各企业提供的12批酒川芎样品和3批川芎药材进行了含量测定，结果见表3。

表2 酒川芎样品及对应原药材信息表

表3 酒川芎中阿魏酸含量测定结果及与川芎药材中阿魏酸变化规律

不同厂家川芎炮制后，阿魏酸的含量差别较大，最高的为0.3712%，最低的为0.2021%。与药材相比，有些炮制后阿魏酸含量基本不变，有些炮制后阿魏酸含量明显降低。综合多批次酒川芎阿魏酸的含量测定结果及实际考察情况，参考《中国药典》2015年版一部“川芎”项下，拟定酒川芎中阿魏酸含量限度同药材及饮片，为“本品按干燥品计算，含阿魏酸（C10H10O4）不得少于0.10%。”

2.10 耐用性试验 采用拟定的方法，采用不同的液相色谱仪，使用两个不同的色谱柱对同一批样品进行测定，测定结果表明，本方法耐用性较好。

3 总结与讨论

川芎中阿魏酸的含量测定已有报道[7-8]，但酒川芎中阿魏酸的含量测定鲜见报道，本文建立的含量测定方法，可以很好地应用于酒川芎中阿魏酸的测定。本研究含量测定方法简便、准确，可用于川芎及其炮制品酒川芎中阿魏酸含量的测定研究。

由以上结果可知，四川产地的川芎原药材样品中阿魏酸的含量比安徽的高，湖南然润堂中药有限公司提供的酒川芎中阿魏酸含量最高，湖南新汇制药股份有限公司提供的酒川芎中阿魏酸含量最低。而湖南然润堂中药有限公司采用的原药材与湖南新汇制药股份有限公司采用的原药材均来自四川，且原药材中阿魏酸含量并无太大差异，说明厂家炮制工艺对川芎中阿魏酸的含量变化影响很大。

由表3可以看出，酒川芎中阿魏酸含量相对于川芎药材和饮片而言，其中一个企业稍有增加（无显著性变化），但该企业提供的川芎原药材为饮片，说明酒炙工艺对川芎中阿魏酸含量影响不大；另两家企业提供的是川芎药材，炮制后阿魏酸含量明显下降，由于酒炙工艺对川芎中阿魏酸含量影响不大，推测可能是润洗工艺对川芎中阿魏酸含量有较大影响，具体原因可作进一步研究。