杨 静 陈 娜 崔晓雪

天津渤海职业技术学院环境与化工学院 天津 300042

黄芩是我国传统中药材之一，其次生代谢产物含量黄芩苷等具有清热燥湿、消炎、抗病毒和抗菌等多种病理效用[1]。利用悬浮培养技术可以获得高质量、高产量的黄芩替代品，具有次生代谢产物含量高、抗氧化活性较强的优点。近年来，国内对于植物细胞悬浮培养研究有较多报道。黄燕芬[2]等研究了碳氮磷营养对百蕊草悬浮培养细胞生长的影响。曲丹[3]考察了碳源对迷迭香悬浮培养细胞的生长、迷迭香酸积累及抗氧化酶活性的影响。本文通过考察黄芩细胞悬浮培养过程的碳源、氮源和磷源对黄芩细胞生长和黄芩苷产物合成的影响，为大规模利用黄芩悬浮培养细胞技术生产黄芩苷提供基础数据和理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

黄芩种子购自河北省安国市药材市场，黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所；化学试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器

TCYA ZYSA0351型摇床，202型电热恒温干燥箱，BCN-1360型超净工作台，Satorius BS 2202S型电子天平，UV-7500紫外分光光度计，HPG-280B强光照培养箱等。

1.3 方法

1.3.1 黄芩无菌苗的获得

取饱满的黄芩种子用75%的乙醇浸泡1min，用无菌水冲洗3次，在2%的次氯酸钠溶液中进行表面消毒20min，再用无菌水冲洗5次。

将消毒灭菌的种子接种于添加0.2mg/L6-BA的MS培养基上，pH5.8，光照16h培养，4～5d种子萌发，20d后可得长势良好的试管苗。

1.3.2 黄芩愈伤组织的诱导

取黄芩试管苗幼嫩茎段，用自来水冲洗干净，75%的乙醇消毒30s，无菌水冲洗3次，切成0.5cm左右长的小段，接种于愈伤组织诱导培养基上培养。……