陈小红，梁婉娇，黄诗舒，孙 晏，罗 欣，赖 璐，池昭晟，陈梅珠，王云鹏，严伟明

0 引言

应用已知抗体和抗原发生特异性结合，并通过化学反应使标记在结合后的特异性抗体上的显色剂(如荧光素、酶、金属离子和核素)显色，以确定组织细胞内抗原的存在，对其进行定位、定性及半定量研究，称为免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)[1]。目前广泛应用于肿瘤疾病、感染疾病及药物靶向治疗等方面[2]。

内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)反应主要包括三种通路，即肌醇需要酶1(inositol-requiring protein-1，IRE1)通路、转录激活因子6(activating transcription factor-6，ATF6)通路、蛋白激酶样内质网激酶(PKR-related ER kinase，PERK)通路。当发生ERS时，其上、下游多种相关信号分子亦发生相应的改变，本研究选用葡萄糖调剂蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12，Caspase-12)作为反应ERS的上、下游分子的检测指标。

近年研究发现，多种视网膜色素变性(retinitis pigmentosa，RP)模型中内质网有异常蛋白堆积，有相应ERS反应发生[3-5]；目前在RP动物模型的构建中，N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea，MNU)诱导的RP模型已被广泛报道[6-8]。IHC亦应用于ERS通道研究[9-13]，但其在ERS通道相关抗体使用浓度缺乏统一标准，且因实验标本不同，根据抗体说明书建议稀释比例进行IHC，其结果可能过强或较弱。因此，本研究选用MNU诱导的小鼠RP模型，应用IHC技术检测其视网膜ERS反应通路，探讨IRE1、ATF6、PERK、GRP78、Caspase-12抗体的最佳使用浓度，以期为研究RP发病机制及干预措施提供相应指标的检测方法。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物清洁级、健康雄性C57BL/6J小鼠[上海昇敞生物科技有限公司，SCXK(沪)2021-0002]，6～8周龄，体质量16～20g。于室温22℃～25℃、明暗交替12h/12h的环境中适应性饲养14d，食水不限。实验动物的使用遵循视觉与眼科研究协会(Association for Research in Vision and Ophthalmology，ARVO)相关规定，并通过伦理审查(2021-001)。……