陈真阳

（中国医药保健品有限公司，北京 100101）

咖啡属茜草科（Rubiaceae）咖啡属（Coffea）多年生常绿灌木或小乔木，原产于非洲埃塞俄比亚，栽培较多的有小粒种（Coffea arabicaLinnaeus）、中粒种（Coffea canephoraPierre ex Froehner）和大粒种（Coffea libericahiern）[1]。咖啡是世界三大饮料之一，药理研究证明咖啡具有抗炎作用[2]，咖啡中所含的咖啡因具有缓解体力疲劳、增强免疫力作用[3-4]。但有关速溶咖啡粉对小鼠免疫功能的影响目前报道较少，因此本文对此进行试验研究。

1 材料与方法

1.1 受试物

速溶咖啡粉是以咖啡豆为主要原料，经焙烤、粉碎后用水萃取可溶物，再经蒸发和干燥而得到的纯咖啡。咖啡因含量＞2%。速溶咖啡粉每日推荐量为每人每天2 g，按每人体重60 kg计算，折合剂量为0.0333 g·（kg bw）-1。

1.2 受试物配制

根据人体口服推荐剂量，设低、中、高3个剂量组，分别为0.167 g·（kg bw）-1、0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1（相当于人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍）。分别取样品1.67 g、3.33 g、10.0 g加蒸馏水定容至200 mL，分别给小鼠灌胃，每天1次，灌胃体积0.2 mL/10 g bw，对照组给予等体积蒸馏水，连续灌胃至少30 d后测定指标。

1.3 实验动物

SPF级雌性昆明种小鼠，18～22 g。按体重每40只小鼠为一大组，共5大组。免疫Ⅰ组：进行碳廓清实验；免疫Ⅱ组：NK活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）；免疫Ⅲ组：半数溶血值测定、抗体生成细胞数的测定（Jerne改良玻片法）；免疫Ⅳ组：迟发型变态反应实验（DTH）（足跖增厚法）；免疫Ⅴ组：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法）。将5大组动物每大组再按体重随机分成4小组，每组10只动物。

1.4 试剂与仪器

绵阳红细胞（SRBC）、Hank’s液、小牛血清、生理盐水和印度墨汁等试剂。

分析天平、分光光度计、恒温水浴箱、离心机、CO2培养箱和酶标仪等。

1.5 试验方法

1.5.1 细胞免疫功能检测

迟发型变态反应（DTH）（足跖增厚法）、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验（MTT法），按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）的规定进行检测[5]。

1.5.2 体液免疫功能检测

含抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）、半数溶血值（HC50）的测定，按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）的规定进行检测。

1.5.3 单核-巨噬细胞功能测定

含小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法），按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）的规定进行检测。

1.5.4 NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶测定法）

按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）的规定进行检测。

1.6 数据统计

实验数据采用（x—±s）表示，应用SPSS 13.0统计软件对试验数据进行单因素方差分析和两两比较，P=0.05作为检验水准。

2 结果与分析

2.1 速溶咖啡粉对小鼠细胞免疫功能的影响

由表1可知，0.333 g·（kg bw）-1（中剂量组）、1.000 g·（kg bw）-1（高剂量组）小鼠足跖肿胀度显著大于对照组，差异有显著性（P＜0.05）。1.000 g·（kg bw）-1剂量组（高剂量组）能增加小鼠脾淋巴细胞转化能力，与对照组比较差异有显著性（P＜0.05）。说明速溶咖啡粉对小鼠细胞免疫功能具有增强作用。

表1 对小鼠细胞免疫功能的影响(x—±s)

2.2 速溶咖啡粉对小鼠体液免疫功能的影响

由表2可知，1.000 g·（kg bw）-1剂量组能增加小鼠抗体生成细胞数，与对照组相比差异有显著性（P＜0.05）。1.000 g·（kg bw）-1剂量组能增加小鼠半数溶血值（HC50），与对照组相比差异有显著性（P＜0.05）。说明速溶咖啡粉对小鼠体液免疫功能具有增强作用。

表2 对小鼠体液免疫功能的影响(x—±s)

2.3 速溶咖啡粉对单核-巨噬细胞功能的影响

由表3可知，0.167 g·（kg bw）-1、0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1剂量组对单核-巨噬细胞碳廓清能力未见明显影响，与对照组相比差异无显著性（P＞0.05）。0.167 g·（kg bw）-1、0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力未见明显影响，与对照组比较差异无显著性（P＞0.05）。说明速溶咖啡粉对单核-巨噬细胞功能无影响。

表3 对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响(x—±s)

2.4 速溶咖啡粉对小鼠NK细胞活性的影响

由表4可知，0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1剂量组能增加NK细胞活性，与对照组比较差异有显著性（P＜0.05）。说明速溶咖啡粉对小鼠NK细胞活性具有增强作用。

表4 对小鼠NK细胞活性的影响(x—±s)

3 结论

根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的规定，在受试样品低、中、高这3个剂量组中，应设一个10倍剂量组（以人每日每公斤体重推荐摄入量计算），高剂量不得超过30倍。故本研究以人每日日推荐摄入量的5倍、10倍、30倍剂量连续给予小鼠灌胃速溶咖啡粉30 d，结果显示速溶咖啡粉对小鼠具有一定的增强免疫力作用，为速溶咖啡粉的配方应用提供了依据。