陈思涵，周鹏，陈云生，王永生，王汉青

(1.南华大学 资源环境与安全工程学院，湖南 衡阳 421001；2.南华大学 公共卫生学院，湖南 衡阳 421001；3.建筑环境气载污染物治理与放射性防护国家地方联合工程研究中心，湖南 衡阳 421001)

金属硫蛋白广泛存在于动物肝脏、肾脏、胰腺和小肠等脏器中，具有消除体内自由基、延缓机体衰老、参与微量元素储存、转运和代谢以及对重金属解毒的作用[1]。金属硫蛋白作为内源性细胞保护剂，具有稳定细胞膜、抗脂质过氧化、修复细胞和防止癌症发生有着重要作用[2]。近年来，金属硫蛋白作为主要生物标志物已成为研究热点[3-4]。因此，研究建立一种方便、高效、易普及的金属硫蛋白检测新方法十分必要。本文基于吖啶橙荧光染料与金纳米及金属硫蛋白相互作用[5-6]，荧光强度变化在一定条件、范围内呈线性相关的原理，建立了吖啶橙金纳米荧光法测定金属硫蛋白的新方法。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

实验用水为双蒸水(电阻18.25 Ω)；金属硫蛋白、金纳米、柠檬酸钠、盐酸、吖啶橙、氯金酸、柠檬酸三钠均为分析纯。

F-4500型荧光分光光度计；UV-2550紫外-可见分光光度计；PB-20(PB-S)型精密酸度计；78-1型磁力加热搅拌器；PrimoR高速低温离心机；SHHW21-60型电热恒温水浴箱；AB204-S电子分析天平；0.22 μm 针头式过滤器。

1.2 溶液配制

1.2.1 金属硫蛋白标准储存液配制 称取3.0 mg金属硫蛋白，用双蒸水溶解后，移至50 mL容量瓶，定容至刻度，得1.00×10-5mol/L金属硫蛋白标准储存液。用时稀释至1.00×10-6mol/L。

1.2.2 CANa3-HCl缓冲液配制 准确称取2.941 0 g柠檬酸钠，加入双蒸水，在烧杯中充分溶解后，移至1 000 mL容量瓶,定容至刻度，得0.1 mol/L柠檬酸钠-盐酸缓冲液标准液，再用同浓度盐酸调节pH至4.0，备用。……