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荧光定量PCR在药用植物基因表达及鉴别中的应用

2022-12-21李柯帆李晓兰杜晨晖裴香萍

世界中医药 2022年21期
关键词:分析

李柯帆 王 枫 丁 雯 李晓兰 杜晨晖 闫 艳 裴香萍

(1 山西中医药大学中药与食品工程学院,太原,030619; 2 山西大学中医药现代研究中心,太原,030006)

化学定量分析方法由重量分析、容量分析与仪器分析3部分组成。其中仪器分析方法已广泛应用于中药化学成分分离与鉴别、药代动力学研究中的活性成分检测、中药材与中成药质量控制等。核酸作为生命的最基本物质之一,对于药用植物的生长以及活性成分的合成过程至关重要,关于中药化学成分的分析方法已建立较为成熟的体系,而目前常用分子定量技术对核酸进行定性定量的研究。

分子定量技术包括实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和数字PCR(Digital PCR,dPCR)。其中qRT-PCR技术为实现核酸定性定量研究奠定基础,qRT-PCR技术是通过在PCR体系中加入荧光结合集团或荧光探针,利用荧光信号的累积对整个PCR进程进行实时监测的技术。通过实时监测荧光量的变化,获得待测物质达到荧光检测阈值的循环数(Cycle Threshold,Ct值)[1]。PCR过程中,可以通过荧光信号的强度变化实时监测扩增产物量的变化[2]。实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性好、定量准确、快速简便及高通量等特点,因此在微生物分析、食品科学研究、临床诊断、肿瘤早期研究等领域的应用十分广泛。qRT-PCR在微生物生态学领域中常用于对微生物群落的生理代谢、空间分布及动态变化等过程的监测[3]。在医学领域常用于染色体病、基因病的诊断,对肿瘤早期诊断、分型与分期的判断,以及对病原体DNA的定性及定量检测方面的研究[4]。……

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