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粗糙脉孢菌丝切蛋白的纯化及微丝解聚活性分析

2022-12-17陈菁秋孙海涛李艳红陈志玲

生物学杂志 2022年6期
关键词:分析

黄 璐, 陈菁秋, 孙海涛, 李艳红, 陈志玲

(首都师范大学 生命科学学院, 北京 100048)

微丝骨架作为细胞骨架的重要成员,最显著的特征是其动力学性质,通过众多肌动蛋白结合蛋白的调控,完成微丝的解聚、聚合、重排、成束等,进而调控生物体内许多极为重要的生命活动,如细胞极性的建立和维持、细胞生长、细胞分裂、细胞迁移、信号传导等[1]。

丝切蛋白(cofilin)/肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor,ADF)普遍存在于真核生物中,是一类含量丰富、分子质量较小的肌动蛋白结合蛋白,它既能够与单体肌动蛋白(G-actin)结合,使G-actin从微丝(F-actin)上解离下来,也能够切割F-actin,加速F-actin的踏车行为,进而在actin动态周转中发挥重要作用。从20世纪80年代首次利用DEAE纤维素层析柱从鸡胚的脑组织中分离纯化得到cofilin后,至今陆陆续续从其他物种中分离得到160余种编码cofilin/ADF家族成员的基因。cofilin/ADF家族包括:cofilin、脊椎动物ADF或destrin、植物ADF、depactin和actophorin。目前已知所有真核生物中至少含有1种cofilin/ADF异型体,如酿酒酵母、线虫、苔藓的基因组中均含有1个编码cofilin/ADF的基因,拟南芥基因组中含有11个编码ADF的基因[2-3]。有研究报道,利用siRNA技术下调肾COS-7成纤维细胞系中内源cofilin的表达水平后,抑制了细胞凋亡;腺苷酸环化酶1在小鼠卵母细胞成熟过程中通过调节actin的组装发挥作用,下调其表达水平纺锤体的迁移明显减慢,胞质分裂异常,而同时上调cofilin表达水平后,可部分挽救腺苷酸环化酶1下调引起的表型缺陷[4-5]。突变导致的cofilin功能失活对线虫、果蝇和酿酒酵母来说是致死的[6],由此可见,cofilin对真核生物的生命活动是至关重要的。……

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