张海丽，唐成名，苏钰，白振环，王文慧

(菏泽学院农业与生物工程学院，山东 菏泽 274015)

引言

目前，我国记载的害螨有500多种[1]，蠕形螨寄生于人和哺乳动物的毛囊和皮脂腺内，寄生于人体的有两种，即毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨.毛囊蠕形螨感染率明显高于皮脂蠕形螨，混合性皮肤感染率较高[2].螨虫会导致人皮肤过敏，出现红斑、瘙痒、毛囊炎等症状.

牡丹皮化学成分包括酚及酚苷类、单萜、黄酮类和多糖类等[3]，牡丹皮具有抗螨虫[4]、抗菌、抗炎等药理作用[5].丹皮始载于《本经》具有清热凉血、活血化瘀的功效，为历版《中华人民共和国药典》收载品种[6].丹皮酚是一种小分子酚类化合物化学名称2-羟基-4-甲氧基苯乙酮[7]，一般认为丹皮酚是牡丹皮中最主要的活性成分[8].现代药理学研究表明，丹皮酚具有抗炎、抗自由基等作用[9-10]；丹皮酚还具有血管内皮保护作用[11]，在香料、化工领域具有广泛用途[12]，广泛用于洁面乳、美容霜、孕妇防螨衣物、手洗液[13]等产品.

本文制备的中药洁面乳以自由基衰老学说[14]为基础，通过添加丹皮酚为功效成分，既能捕获皮肤表层产生的自由基，延缓皮肤衰老还具有抑菌的功能.丹皮酚的常用提取工艺有蒸馏法、煎煮法及溶剂浸取法等[15].本实验采用乙醇回流提取法，以椰油酰胺丙基甜菜碱、烷基糖苷、珠光素等为表面活性剂[16]，制备性能温和的中药洁面乳，筛选出最佳配方.

1 材料与方法

1.1 实验材料和仪器

1.1.1实验材料

所用实验材料如表1所示.

表1 实验材料

续表

1.1.2 实验仪器

所用实验仪器如表2所示.

表2 实验仪器

1.2 实验方法

1.2.1 丹皮酚提取工艺流程

丹皮酚的提取工艺流程为：洗净牡丹根皮→干燥牡丹根皮→粉碎机粉碎→得到丹皮粉末→称取18 g丹皮粉末→加150 mL蒸馏水到烧杯中→混合搅拌均匀→加入到蒸馏烧瓶中→水蒸汽蒸馏→冷藏蒸馏液→无水乙醇溶解→冷藏→无水乙醇复溶三次→得到干燥丹皮酚晶体.

1.2.2 中药洁面乳的制备

中药洁面乳配方如表3所示.

表3 中药洁面乳配方

准确称量脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、椰子油酰胺丙基甜菜碱、烷基糖苷、乙二醇二硬脂酸、尿囊素、乙二胺四乙酸二钠和水置于烧杯中用恒温水浴锅边搅拌边加热至75 ℃,移开恒温水浴锅继续搅拌到原料溶解冷却至55 ℃，加入库拉索芦荟凝胶冻干、二甲基二烯丙基氯化铵，继续搅拌冷至40 ℃加入香精、少量防腐剂，继续冷却至室温加入丹皮酚，最后用一水合柠檬酸调节pH值为5.6，使用悬臂式高速搅拌器使其充分混合均匀，继续搅拌2.5 h即成成品.

1.2.3 LB固体培养基

LB固体培养基配方如表4所示.

表4 LB固体培养基配方

LB液体培养基与固体培养基配方相同，不加琼脂粉.LB固体培养基配制：使用电子天平称取上述药品.用玻璃棒搅拌使其充分溶解，加氢氧化钠调节pH值为7.4.加入琼脂粉，1 000 mL培养基被分为5瓶，用报纸做严格密封,在121 °C，经过20 min，压力为0.12 MPa.

1.2.4 细菌的培养

将灭菌后的培养基放到超净工作台中.超净工作台使用前要用75%酒精擦拭一遍，并打开紫外杀菌30 min左右，防止杂菌进入.在-80 ℃医用低温冰箱中取出革兰氏阳性菌菌种和革兰氏阴性菌菌种，将两种菌分别加入灭完菌的液体培养基中，在空气浴振荡器37 ℃下200 r/min培养12～16 h，将培养完的种子菌按照1∶1 000的比例分别放入液体培养基中，在空气浴振荡器37 ℃下200 r/min培养3～5 h.

1.2.5 双层固体培养基的制备

分别将等量扩大培养后的菌液倒入离心管，在高速冷冻离心机内离心5 min，转速 5000 r/min，倒掉上清液，加无菌水溶解，再取新的离心管稀释，利用紫外分光光度法，在波长600 nm条件下测OD值，将OD值调整到1.0左右，再将菌液按照1∶1 000加入到固体培养基中，在灭菌的培养皿中倒入薄薄一层不加菌的固体培养基，凝固后倒入厚于第一层的加入菌液的固体培养基，等待凝固.

1.2.6 抑菌实验

用灭完菌的打孔器在培养基上打四个相同的孔，依次加入50 μL、100 μL、150 μL、200 μL中药洁面乳产品，并且设置无菌水对照组，依次加入50 μL、100 μL、150 μL、200 μL无菌水，并做好标记，检测产品抑菌性能.上述步骤全部在超净工作台中进行.放入37 ℃培养箱中培养.

2 结果与分析

2.1 丹皮酚晶体以及洁面乳的制备

2.1.1 丹皮酚晶体的制备

丹皮酚对革兰氏阳性菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌等均有很强的抗菌活性，把丹皮酚添加到洁面乳中，得到温和不刺激、清洁力好、保湿能力强、抑制痤疮兼具美白润肤的产品.经过制备，如图1所示，丹皮酚以白色针状结晶析出.

图1 丹皮酚

2.1.2 中药洁面乳的制备

如图2A所示，制得的洁面乳为液体霜洁面乳，泡沫绵密丰富清洁力良好、温和无刺激.图2B为中药洁面乳产品图，瓶壁上的牡丹花图案不仅体现出产品原料为牡丹，而且也凸显了菏泽学院的校徽，形成具有鲜明牡丹特色的中药洁面乳，并以此产品为载体宣传菏泽学院及菏泽牡丹文化.图3为洁面乳泡沫情况：泡沫绵密.

A洁面乳实物

B洁面乳产品图

图3 洁面乳泡沫情况

2.2 中药洁面乳的功能评价

2.2.1 中药洁面乳抑菌效果

对革兰氏阳性菌以及革兰氏阴性菌的抑菌实验各做三组重复实验，图4为金黄色葡萄球菌抑菌实验结果，A为无菌水对照，B、C、D为产品对金黄色葡萄球菌的抑菌结果，实验结果发现，牡丹中药洁面乳对金黄色葡萄球菌有较高的抑制能力.

图4 牡丹中药洁面乳对金黄色葡萄球菌抑菌实验结果

图5为大肠杆菌抑菌实验结果，A为无菌水对照，B、C、D为产品对大肠杆菌的抑菌结果，实验结果发现牡丹中药洁面乳对大肠杆菌也具有抑制能力.

图5 牡丹中药洁面乳对大肠杆菌抑菌实验结果

表5是牡丹中药洁面乳对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌环直径，三次生物学重复无显著差异.

表5 牡丹中药洁面乳对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌环直径大小 cm

图6是牡丹中药洁面乳对两种细菌的抑菌环直径平均值及标准差，结果显示对两种细菌具有一定的抑菌能力，且生物学重复无显著差异.

图6 牡丹中药洁面乳两种菌抑菌环直径平均值及标准差

综上所述，中药洁面乳对金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌均有良好的抑菌能力，相同含量的中药洁面乳对于金黄色葡萄球菌较大肠杆菌有更强的抑菌能力.

2.2.2 中药洁面乳试用结果

选取有代表性的三位志愿者同学，如图7、图8、图9所示.

图7 一号志愿者使用情况

一号志愿者为敏感肌，皮肤暗沉、皮脂分泌旺盛，在使用之后皮肤明显提亮、皮脂分泌减少、抑制皮肤出油效果明显，该试用者试用之后无任何不良反应.

图8 二号志愿者使用情况

二号志愿者为痘痘肌，皮肤干燥、有明显的粉刺痘痘、皮肤暗沉；在使用一天后皮肤提亮效果明显泛红的痘痘得到缓解；在使用三天后皮肤状态整体变好，泛红的痘痘逐渐好转、面部水润有气色，二号志愿者试用之后无任何不良反应.

图9 三号志愿者使用情况

从图9中可以得出志愿者三号皮肤出油严重，皮肤暗沉无光泽，毛孔粗大；在使用一天之后皮肤滋润，祛除面部油光；在使用三天以后面部明显提亮，泛红的痘痘得到缓解消失，皮肤开始变得细腻，三号志愿者试用之后并无任何不良反应.

表6为本论文中药洗面奶效果测评表，“++”表示特别满意；“+”满意；“-”不满意；“--”十分不满意.

表6 泡沫洗面奶效果测评表

从表6可以看出，大多数人对于此款牡丹中药洁面乳在外观、分散性、泡沫、清洁力、香气、刺激性都比较满意，与预期相符.据调查试用推测出超过90%左右的人群对于中药洁面乳的外观、分散性、泡沫、清洁力满意；80%左右的人对于中药洁面乳的香气和刺激性满意.

3 结论与讨论

3.1 中药洁面乳抑菌结果分析

大肠杆菌为革兰氏阴性菌，易在普通培养基上增殖，常寄生在人体内，注意脸部皮肤清洁，一般不会引起皮肤病.金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌代表.葡萄球菌可通过多种途径侵入人体，导致皮肤或器官的感染.

此抑菌试验很好的证明了中药洁面乳对于大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的抑菌能力，表明了此产品抑菌效果良好，有效的减轻、预防各种皮肤问题的发生.敏感肌、油痘肌在使用过程中也无任何不良反应.

3.2 对中药洁面乳的展望

丹皮酚，是一种有机化合物，是从牡丹的干燥根皮中提取物出来的一种有效成分.具有镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化等作用，对皮肤瘙痒、带状疮疹、湿疹具有较好的治疗功效，牡丹皮具有抗螨虫、抗菌、抗炎等药理作用，在洁面乳中具有良好的效果.

烷基糖苷的成分取自纯植物.现在市面上大多护肤品成分都取自纯植物，所以洁面乳里含有的纯植物成分，基本能满足人们诉求.烷基糖苷里含有羟基成分，因为羟基亲水，在水中不会电离，性能相对含有氨基酸的洁面乳而言更加稳定.含有烷基糖苷洁面乳特别适合油皮、敏感肌的人们使用.烷基糖苷洁面乳是一种极其温和的洁面清洁剂.烷基糖苷在酸性溶液和碱性溶液里能呈现相容性以及稳定性.含有烷基糖苷的洁面乳对肌肤很温和，对眼睛也没有刺激.只含有烷基糖苷的清洁剂比较弱，很少能单独起到清洁的作用，往往要掺杂其它元素才能有效清洁，减少对皮肤的刺激.我们制备的中药洁面乳有助于为肌肤抑菌补水，改善肌肤干燥状况，提亮肤色.

将来希望在丹皮的基础上添加其它天然中药成分，如黄柏，艾叶等天然中药材.黄柏具有活血化瘀、清热凉血、抑菌杀菌、平衡油脂分泌的作用.现代研究表明，黄柏具有除螨、杀菌、抑菌、促进组织再生的作用，其含有的中药成分能深入毛囊深处，平衡油脂.艾叶具有驱除螨虫的作用，螨虫对于艾叶的药香味比较排斥，所以艾叶成分加入到洁面乳中可以驱除螨虫，致使螨虫远离皮肤，此外艾叶也对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白喉杆菌有不同程度的杀灭作用，对流感病毒、疱疹病毒也有一定的抑制作用.在此基础上做洁面乳的祛螨实验，以使中药洁面乳达到抑菌、清洁、祛螨、滋润、温和等多重功效.